[發(fā)明專利]一種提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911242201.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN110777082B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范詠梅;張業(yè)揚(yáng);吳迪;應(yīng)芳;徐成濱;張曉凱;孫明凱;劉詩穎;鄭世祥;趙文宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京業(yè)騰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 董存壁

本發(fā)明涉及一種提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的固體培養(yǎng)基，由以下重量份的原料組成：2?8份水，2?8份黃豆粉，2?8份綠豆粉,2?8份玉米粉，2?8份麥麩。培養(yǎng)方法：取棒束孢真菌在薩氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天，然后將分生孢子用0.6～1％的吐溫80洗脫下來制成孢子懸浮液，將孢子懸浮液濃度調(diào)整成1×10⁶個(gè)/ml，然后接種于無瓊脂的薩氏培養(yǎng)基內(nèi)，于27℃，200r/min的搖床內(nèi)震蕩培養(yǎng)48h，得到種子液；將種子液接種到固體培養(yǎng)基內(nèi)，攪拌均勻，然后置于27℃的培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)15天，得到固體培養(yǎng)物。本發(fā)明的固體培養(yǎng)基原料簡(jiǎn)單，成本低，采用其培養(yǎng)棒束孢真菌后，產(chǎn)孢量高達(dá)4.493×10¹⁰個(gè)孢子/g。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

目前，在我國(guó)，已有記錄的棒束孢屬真菌約16種，其中較為常見、研究最多的為玫煙色棒束孢(Isariafumosorosea)、蟬棒束孢(Isaria cicadae)、粉棒束孢(Isariafarinosa)等(ZimmermannG，2008)。其中，玫煙色棒束孢在北美和歐洲已被用于溫室害蟲的生物防治，現(xiàn)有技術(shù)中已有相關(guān)真菌殺蟲劑產(chǎn)品登記注冊(cè)用于溫室粉虱(Aleyrodidae)、蚜蟲(Aphidoidea)、薊馬和蚧殼蟲(Coccoidea)的防治(孟祥云，2011)。棒束孢真菌BS-1屬于棒束孢屬(Isaria sp.)隸屬盤菌亞門(Pezizomycotina)糞菌綱(Sondariomycetes)肉座菌目(Hypocrellales)蟲草科(Conlycipitaceae),棒束孢屬真菌BS-1與枚煙色棒束孢屬于同一個(gè)屬，BS-1對(duì)于普通大薊馬具有很高的致病力。

目前用于培養(yǎng)棒束孢真菌的培養(yǎng)基產(chǎn)孢量都不太理想，有報(bào)道稱玫煙色棒束孢的最佳培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，菌絲生長(zhǎng)的最佳溫度為30℃，最佳的產(chǎn)孢溫度為25℃(田晶等，2014)；也有報(bào)道采用固液兩相的培養(yǎng)方法，將玫煙色棒束孢接種到薩式液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后作為母液接種到由11％麥麩和76％的棉籽殼組成的固體培養(yǎng)基中，其產(chǎn)孢量最高可達(dá)2.15×10⁹個(gè)孢子/g(曹娜，2018)，等等。這些用于培養(yǎng)棒束孢真菌的培養(yǎng)基產(chǎn)孢量都不太理想，因此急需一種利于提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

技術(shù)方案

一種提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的固體培養(yǎng)基，由以下重量份的原料組成：2-8份水，2-8份黃豆粉，2-8份綠豆粉,2-8份玉米粉，2-8份麥麩。

進(jìn)一步，所述固體培養(yǎng)基由以下重量份的原料組成：4-8份水，2-6份黃豆粉，2-8份綠豆粉,4-8份玉米粉，2-8份麥麩。更優(yōu)選為：6份水，2份黃豆粉，4份綠豆粉,8份玉米粉，6份麥麩。

所述固體培養(yǎng)基的制備方法：按配方將各原料混合均勻，然后放入濕熱滅菌鍋內(nèi)121℃滅菌30min，冷卻后備用。

一種提高棒束孢真菌產(chǎn)孢量的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

(1)液體培養(yǎng)階段：

取棒束孢真菌在薩氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天，然后將分生孢子用0.6～1％的吐溫80洗脫下來制成孢子懸浮液，將孢子懸浮液濃度調(diào)整成1×10⁶個(gè)/ml，然后接種于無瓊脂的薩氏培養(yǎng)基內(nèi)，于27℃，200r/min的搖床內(nèi)震蕩培養(yǎng)48h，得到種子液；

(2)固體培養(yǎng)階段：

取5mL種子液接種到固體培養(yǎng)基內(nèi)，充分?jǐn)嚢杈鶆颍缓笾糜?7℃的培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)15天，得到棒束孢真菌固體培養(yǎng)物，測(cè)試棒束孢真菌固體培養(yǎng)物中的孢子含量，即可。