[發明專利]一種膽南星定量指紋圖譜質量監測方法

有效

• 申請號: 201911241753.0
• 申請日: 2019-12-06
• 公開（公告）號: CN112924569B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 梁鑫淼;喬亞麗;沈愛金;徐青;劉艷芳;郭學東;陳相銀;張紅蓮
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86;G01N30/64;G01N30/74
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 鄭偉健

1.一種膽南星定量指紋圖譜質量監測方法，可同時實現膽南星中天南星和膽汁類成分的指紋圖譜監測及多指標成分的定量檢測，包括以下步驟：

1）膽南星樣品供試液制備及色譜分析；

2）混合對照品溶液配制及色譜分析；標準品包括膽酸、甘氨豬去氧膽酸、甘氨鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、豬去氧膽酸甲酯、維采寧-2、夏佛托苷和異夏佛托苷；制備含有膽酸、甘氨豬去氧膽酸、甘氨鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、豬去氧膽酸甲酯、維采寧-2、夏佛托苷和異夏佛托苷的混標液；將其色譜圖與膽南星樣品色譜圖對比，對膽南星樣品中的上述物質進行定性；

3）膽汁酸類成分的定量分析；配制含有甘氨豬去氧膽酸、甘氨鵝去氧膽酸混標液1，取2份以上的部分混標液1并將其稀釋成不同濃度的2個以上稀釋液，將混標液1和稀釋液分別進行色譜分析；配制含有豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸的混標液2，取2份以上的部分混標液2并將其稀釋成不同濃度的2個以上稀釋液，將混標液2和稀釋液分別進行色譜分析；分別以甘氨豬去氧膽酸、甘氨鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸的峰面積lg值和體積濃度lg值為橫縱坐標分別繪制它們的標準曲線；將膽南星樣品色譜圖中上述對應物質峰面積lg值代入上述標準曲線，獲得體積濃度lg值，進一步計算獲得其質量濃度；

4）不同廠家和/或不同批次膽南星樣品的質量評價，包括膽南星的品質高低評價及原料藥天南星真偽評價:

i.以步驟2）中是否可同時檢測到維采寧-2、夏佛托苷、異夏佛托苷三種物質的紫外色譜峰作為評價膽南星所用天南星為正品或偽品的標準，膽南星所用天南星為真品時可以同時檢測到維采寧-2、夏佛托苷、異夏佛托苷三種物質的紫外色譜峰，否則為偽品；偽品為虎掌南星；

ii.膽南星品質高低的評價標準為甘氨豬去氧膽酸、甘氨鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸的總含量，當四種物質的總含量大于等于8 mg/g時品質等級為優質，小于8 mg/g時品質等級為統貨或普貨；所述膽南星樣品供試液制備：取膽南星樣品，搗碎打粉，過20~60目篩，稱取通過篩子的粉末0.5~2 mg，置于容器中，按1mg粉末：10~50mL體積加入提取劑，超聲30 min~90 min，離心5~10 min，取上清液過0.45 μm孔徑的尼龍濾膜，即得；膽南星樣品處理中用到的提取劑為：體積濃度50%~100%甲醇/水，或50%~100%乙醇/水；

所述色譜分析條件為：色譜柱為Symmetry Shield RP18 ，規格為：4.6×250 mm, 5 μm, 100 ?或XBridge Shield RP18，規格為：4.6×250 mm,5 μm, 100 ?；流速為0.7~1.3mL/min；柱溫為25℃~45℃；流動相A為體積濃度0.2％~0.8%三氟乙酸/水溶液，流動相B為乙腈；洗脫梯度：0～15 min，線性10％～36％B；15～50 min，線性36％～65％B；50～60 min，線性65％～95％B；60～70 min，95％B；色譜檢測方式為紫外檢測器與電霧式檢測器串聯，天南星來源的化學成分采用紫外檢測器進行檢測，膽汁來源的化學成分采用電霧式檢測器進行檢測；紫外檢測采用雙波長紫外檢測器或者多波長陣列式檢測器，檢測波長為330 nm。

2.如權利要求1所述的膽南星定量指紋圖譜質量監測方法，其特征在于，步驟2）混合標準品溶液配制方式為：分別稱取所述標準品各1 mg于同一容器中，用體積濃度50~100%甲醇/水溶解稀釋各標準品至0.02~5 mg/mL濃度即可；色譜峰指認依據為，相同色譜條件下分析時保留時間一致。

3.如權利要求1所述的膽南星定量指紋圖譜質量監測方法，步驟3）混標液的配制方法為：稱取約25 mg各標準品于同一25 mL容量瓶中，采用體積濃度50%~100%甲醇/水，或50%~100%乙醇/水充分溶解后定容至刻度，得混標液；稀釋液的配制方法為：分別移取所述的混標液5 mL、3 mL、2 mL、1 mL、0.5 mL、0.25 mL于10 mL容量瓶，加體積濃度50%~100%甲醇/水或50%~100%乙醇/水稀釋至刻度，得濃度點1、2、3、4、5、6。

4.如權利要求1所述的膽南星定量指紋圖譜質量監測方法，膽汁酸類成分的定量分析過程為：步驟3）中，將不同濃度的稀釋液按濃度由低到高依次進樣分析，以濃度mg/mL的lg值為橫坐標、峰面積pA*min的lg值為縱坐標，繪制各標準品的標準曲線；相同色譜條件下分析膽南星樣品，將峰面積帶入到對應的標準曲線，即得供試品溶液中的體積濃度mg/mL，結合樣品濃度可計算得到每克膽南星樣品中所含膽汁酸類成分的質量，即質量濃度mg/g。