[發(fā)明專利]一種用于糖尿病早期診斷的多肽標志物及檢測試劑盒和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911238679.7
• 申請日: 2019-12-06
• 公開（公告）號: CN112924608A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳仁安;王莉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 鄭偉健

本發(fā)明涉及醫(yī)學生物檢測領(lǐng)域，具體為多肽標志物在制備糖尿病診斷試劑或試劑盒中的新用途。本發(fā)明提供了一種利用液相色譜?質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring,MRM)定量檢測血清中內(nèi)源多肽的方法及試劑盒，通過本發(fā)明中的試劑及方法，定量測定人血清中多肽標志物GVLSSRQLGLPGPPDVPDHAA的含量，進而基于二元邏輯回歸方程計算標志物變量以及確定的截點值，用于糖尿病的預(yù)警和/或診斷。本發(fā)明的試劑盒和檢測方法穩(wěn)定性好，特異性高，具有臨床推廣的潛力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學生物檢測技術(shù)及代謝性疾病的診斷、預(yù)防和治療領(lǐng)域，具體地說，是基于定量測定人血漿內(nèi)源多肽的方法及多肽標志物在制備糖尿病早期預(yù)警和/或診斷的試劑盒和方法。

背景技術(shù)

據(jù)2017年國際糖尿病聯(lián)盟數(shù)據(jù)顯示，全球糖尿病患者已有4.15億，其中2型糖尿病(type 2diabetes，T2DM)占95％以上。預(yù)計到2030年，全球糖尿病患病人數(shù)將增至5.52億。糖尿病是繼心血管疾病和腫瘤后危害人類健康的第3大疾病。目前，雖然2型糖尿病的診斷標準已明確，具有口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)等金標準，但因其糖尿病初期無明顯癥狀且潛伏期長，至癥狀出現(xiàn)或臨床確診后再干預(yù)治療，病情往往已不可逆轉(zhuǎn)，錯失去了最佳干預(yù)時期，尋找用于早期預(yù)警及診斷的生物標志物對于研究糖尿病的病理、分類、早期診斷、延緩及預(yù)防糖尿病的發(fā)生具有重要意義。

采用多組學技術(shù)發(fā)現(xiàn)新的診斷標志物是當前研究的熱點。多肽在糖尿病的發(fā)病過程及干預(yù)治療中具有重要地位，如諸多的多肽藥物如胰高血糖素樣肽-1(glucagon-likepeptide 1,GLP-1)類似物、度拉魯肽(dulaglutide)、腦鈉肽(brain natriureticpeptide，BNP)等肽類制劑。多肽可以體現(xiàn)不同生理病理條件下蛋白的合成、加工和降解過程，同時，對基因的表達、物質(zhì)代謝等過程又有調(diào)節(jié)作用，因此，采用多肽組學技術(shù)發(fā)現(xiàn)新型多肽生物標志物用于糖尿病的早期預(yù)警/診斷具有巨大潛力。

標志物驗證：目前已發(fā)現(xiàn)的2型糖尿病潛在生物標志物包括基因變異、RNA轉(zhuǎn)錄子、多肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和小分子代謝產(chǎn)物(支鏈氨基酸/芳香氨基酸)等，但多為來自并發(fā)癥樣本，如糖尿病腎病，糖尿病伴高血壓及高血糖樣本,妊娠糖尿病等(中國專利CN106645757A；醫(yī)學綜述,2019,(20),4080-4086；Mol Cell Proteomics，2010，9(10)，2099-2108；中華實用診斷與治療雜志,2018,32(01),1-4)，一般出現(xiàn)并發(fā)癥，糖尿病已處于確診且不可逆轉(zhuǎn)的后期階段，缺少針對糖尿病本身及用于早期診斷的生物標志物；此外，采用多組學技術(shù)篩選出差異標志物后缺少進一步的臨床樣本驗證工作，因此導致臨床應(yīng)用價值有限；或采用ELISA或Western blot驗證，實驗成本高且通量不足(中國專利CN108957011；色譜，2019，37(8)：853-862；中國全科醫(yī)學,2014,(21),2524-2527)。

基于以上研究中存在的問題，本發(fā)明采用非靶向多肽組學和靶向定量多肽組學結(jié)合的方法，該方法具有通量高、數(shù)據(jù)重復(fù)性好、靈敏度高的特點。采用從發(fā)現(xiàn)到驗證的策略篩選潛在的診斷標志物，從糖尿病前期臨床樣本(無并發(fā)癥)中成功篩選并驗證人血清中內(nèi)源多肽標志物，可用于糖尿病的早期預(yù)警及/或診斷，該標志物的診斷靈敏度和特異性均良好，并制備了一種可用于定量測定目標多肽含量及用于糖尿病早期預(yù)警和/或診斷的試劑盒，該試劑盒目前還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對糖尿病早期預(yù)警診斷標志物匱乏及靈敏度低、特異性低等問題，采用非靶向多肽組學發(fā)現(xiàn)差異多肽及靶向多肽組學驗證的策略，提供一種多肽標志物在糖尿病早期預(yù)警/診斷中的應(yīng)用及試劑盒，同時提供了可用于上述多肽標志物定量分析檢測的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：