[發(fā)明專利]同時(shí)定量檢測面粉中兩種毒素的檢測卡及其制備和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911237059.1
• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN110940811A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜道林;杜霞;洪霞
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

本發(fā)明公開了同時(shí)定量檢測面粉中兩種毒素的檢測卡，包括樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水墊；其中膠體金膜包被了檢測抗體膠體金標(biāo)記物，硝酸纖維素膜包被了嘔吐毒素抗原的檢測線T1、伏馬毒素抗原的檢測線T2、以及IgG抗體的質(zhì)控線C。并公開了其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對面粉中伏馬毒素和嘔吐毒素進(jìn)行快速檢測，檢測方法快捷簡便、成本低廉、靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及同時(shí)定量檢測面粉中兩種毒素的檢測卡及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

伏馬菌素(FB)是一種霉菌毒素，主要污染糧食及其制品，可產(chǎn)生急性毒性反應(yīng)及潛在的致癌性。

嘔吐毒素，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)，屬單端孢霉烯族化合物，因其能夠引起豬的嘔吐而得名，對人體有一定危害作用，為三級致癌物。

伏馬毒素和嘔吐毒素時(shí)刻威脅著人類和家畜的健康，目前的檢測方法包括膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)，其能夠定性檢測單一種類真菌毒素殘留，滿足現(xiàn)場快速的要求，但是只能定性，且靈敏度較低，肉眼觀察主觀性較強(qiáng)，重復(fù)性差。因此，一種同時(shí)可檢測多種真菌素殘留、重復(fù)性強(qiáng)、可定量的檢測方法急需被開發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容

本申請?zhí)峁┝送瑫r(shí)定量檢測面粉中兩種毒素的檢測卡，能夠同時(shí)快速檢測面粉中嘔吐毒素和伏馬毒素污染，且操作方便、方法簡單。

技術(shù)方案如下：

同時(shí)定量檢測面粉中兩種毒素的檢測卡，包括試紙條；

試紙條包括：樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜、吸水墊和底板；

膠體金膜上包被了檢測抗體膠體金標(biāo)記物，檢測抗體膠體金標(biāo)記物中的檢測抗體包括嘔吐毒素單克隆抗體和伏馬毒素單克隆抗體；

硝酸纖維素膜上IgG抗體為羊抗鼠IgG抗體。

優(yōu)選的，嘔吐毒素抗原為嘔吐毒素-牛血清白蛋白偶聯(lián)抗原；伏馬毒素抗原為伏馬毒素-牛血清白蛋白偶聯(lián)抗原。

優(yōu)選的，上述檢測卡還包括檢測卡外殼，檢測卡外殼設(shè)有加樣窗口和檢測結(jié)果顯示窗口；

樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜以及吸水墊依次粘貼在底板上，樣品墊和膠體金膜交叉重疊，膠體金膜和硝酸纖維素膜交叉重疊，硝酸纖維素膜和吸水墊交叉重疊，試紙條置于檢測卡外殼內(nèi)，使樣品墊位于加樣窗口處，硝酸纖維素膜位于檢測結(jié)果顯示窗口處。

同時(shí)定量檢測面粉中兩種毒素的檢測卡的制備方法，包括如下步驟：膠體金膜的制備、硝酸纖維素膜的包被、樣品墊的制備和檢測卡的組裝；

膠體金膜的制備方法為：

(1)膠體金溶液制備：取經(jīng)王水處理過夜后的容器，加入超純水、氯金酸，磁力加熱攪拌至溶液沸騰后，加入檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)攪拌加熱，至顏色完全變?yōu)橥该鞯淖霞t色，保持溶液沸騰1-5min后，停止加熱，室溫?cái)嚢枥鋮s，保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)檢測抗體的預(yù)處理：將要標(biāo)記的嘔吐毒素單克隆抗體和伏馬毒素單克隆抗體分別用透析溶液透析12-48h，微孔濾膜過濾，稀釋備用；

(3)檢測抗體膠體金標(biāo)記物的制備：取步驟(1)中的膠體金溶液兩份，調(diào)節(jié)溶液pH，而后分別加入步驟(2)中稀釋后的嘔吐毒素單克隆抗體和伏馬毒素單克隆抗體進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行封閉處理，封閉完成后，溶液離心棄上清，將沉淀稀釋得到嘔吐毒素單克隆抗體膠體金標(biāo)記物和伏馬毒素單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；

(4)膠體金膜的制備：將步驟(3)嘔吐毒素單克隆抗體膠體金標(biāo)記物和伏馬毒素單克隆抗體膠體金標(biāo)記物等體積混合均勻后，噴在載體玻璃纖維素膜上，自然晾干或烘干。

優(yōu)選的，膠體金膜制備的具體方法為：