[發明專利]一種制備掃描電鏡用泥炭蘚樣品的鑄型方法

有效

• 申請號: 201911236637.X
• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN110927192B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 卜貴軍;汪正祥;邸慧慧;李政騁;李盛強;吳林
• 申請（專利權）人: 湖北民族大學
• 主分類號: G01N23/2202
• 分類號: G01N23/2202
• 代理公司: 北京卓特專利代理事務所(普通合伙) 11572
• 代理人: 段宇

本發明公開了一種制備掃描電鏡用泥炭蘚樣品的鑄型方法，涉及制備掃描電鏡用草本植物樣品領域，解決了現有技術中聚合樹脂難以從泥炭蘚剝離的難題，包括取材、固定、漂洗及脫水、置換及干燥、樹脂鑄型、軟化、腐蝕及清洗、鍍金及觀察，即完成掃描電鏡用泥炭蘚鑄型樣品的制備。本發明的優點在于：1)解決了聚合樹脂難以從泥炭蘚剝離的難題；2)結合掃描電鏡的使用，能夠更加立體的了解泥炭蘚內部腔體，透明細胞及綠色細胞的細微結構，達到進一步了解其水分及物質運輸，更有益于后續對泥炭蘚的開發與應用；3)本發明簡單容易操作，技術成本低，適用于多孔的苔蘚植物及所取材料可以吸收并向上運輸樹脂的植物。

技術領域

本發明涉及制備掃描電鏡用草本植物樣品領域，尤其涉及一種制備掃描電鏡用泥炭蘚樣品的鑄型方法。

背景技術

泥炭蘚生長在沼澤地區或森林洼地，它的植物細胞有非常出色的儲水功能，在干燥狀態下呈灰白色叢生狀態。對比脫脂棉的吸水能力，它的吸水性還要更強大一些，由于泥炭蘚的消毒作用，在其經過消毒加工之后，可代替脫脂棉成為制作急救包和敷料的材料。另外，泥炭蘚在現實生活中的應用相當廣泛，包括醫藥衛生方面、包裝運輸、環境保護、能源開發和農學生物學方面等，近年來泥炭蘚被開發出新的應用領域就是能源開發領域，由于泥炭蘚屬苔蘚綱泥炭蘚科植物，是重要的造炭植物之一，其固定造炭總量在北半球泥炭沼澤固定造炭總量中足足占了一半，所以是泥炭開發地重建的首選植物。由此可見泥炭蘚的開發與應用是很重要的，通過對泥炭蘚織物內部結構的探索和研究，達到對泥炭蘚更進一步的認識的目的，更有益于后續對泥炭蘚的開發與應用。

對植物內部結構的研究,最常用的是整體觀察、切片等方法，但這些方法有一定的局限性。整體觀察時由于外圍細胞的遮擋，不利于對內部結構的觀察；切片法一般只看到細胞的某個切面，對完整的細胞性狀無法判斷。連續切片結合三維重構在近些年得到了很好的應用，但此方法對材料及技術的要求比較高。樹脂鑄型法(resincastingmethod)最早是在醫學方面研究動物血管的三維結構，近年來研究者們用樹脂注入一些植物的內部組織結構中，就比如植物纖維的內腔和細胞間的腔隙，樣本經過軟化試劑和濃硫酸的浸泡把細胞壁處理后，可以得到清晰明顯的植物木質部內部結構和其完整的三維結構的模型，并以此技術研究植物方向的外表結構、內部結構和細胞間的縫隙空間等三維結構。現有的國內外關于樹脂鑄型法應用的研究現狀較多傾向于人體器官如人體管道或者是木本植物的結構鑄型研究，很少有比較廣泛的關于草本植物的結構鑄型研究，由于草本植物，尤其是苔蘚植物的生物量較小，在鑄型過程中形成的聚合樹脂難以剝離，嚴重影響了對苔蘚植物的內部結構的進一步認識。

發明內容

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種制備掃描電鏡用泥炭蘚樣品的鑄型方法，包括以下步驟：

步驟一、取材：

選取泥炭蘚作為樣品放入試管中；

步驟二、固定：

向試管中加入2.5v％戊二醛固定液固定樣品；

步驟三、漂洗及脫水：

向固定后的樣品試管中加入pH為6.8的0.1mol/L磷酸緩沖液，并反復更換磷酸緩沖液進行漂洗，然后向試管中加入不同體積濃度的乙醇逐級梯度脫水；

步驟四、置換及干燥：

向盛有脫水后的樣品試管中加入不同體積濃度的叔丁醇來脫乙醇，然后進行冷凍干燥，直至將叔丁醇全部除去；

步驟五、樹脂鑄型：

向盛有冷凍干燥后的樣品試管中加入含1％-2％wt的過氧化苯甲酰的苯乙烯溶液，并置于60℃下聚合3-4d；

步驟六，軟化：

向盛有聚合完成后的樣品試管中加入冰乙酸與雙氧水體積配比為1:1的混合液，于50℃下軟化1-2d；