[發明專利]一種卵母細胞培養液及提高卵母細胞質量的體外培養方法

有效

• 申請號: 201911231323.0
• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN110846272B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 蔡更元;吳珍芳;李紫聰;招華興;張寧;鄭恩琴;顧婷;楊化強;洪林君;楊杰
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 北京中普鴻儒知識產權代理有限公司 11822
• 代理人: 曲芳兵

本發明提供了一種卵母細胞培養液，該培養液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相對于未成熟的卵泡液，成熟的卵泡液對卵母細胞體外成熟有積極作用的物質豐度更高，離成熟期越近的卵泡，它的卵泡液越能促進卵母細胞IVM，并改善其質量。使用體內成熟卵泡液作為卵母細胞體外成熟培養液的組分能有效提高卵母細胞的質量，并且能降低卵母細胞中的ROS含量。由此。不僅可以用來改善各種物種(如：牛、羊等)的卵母細胞體外成熟，提高制備優質的體外受精胚胎及克隆胚胎的生產率，還可供人類輔助生殖中卵母細胞體外培養成熟的運用提供參考，以改進現有的卵母細胞體外成熟的培養體系，從而促進生物醫學的發展。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種卵母細胞培養液及提高卵母細胞質量的體外培養方法。

背景技術

豬體細胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技術，在農業、生物醫學、生命科學等領域有著十分重要的應用價值。在農業生產上，使用來自活體動物的體細胞作為體細胞核移植的供體細胞，可產生大量具有相同遺傳信息的后代，這對保護遺傳資源并改善育種生產有著積極作用。同時，轉基因(TG)克隆豬在生物醫學研究中有著廣泛的應用前景。如：TG克隆豬已在異種移植用于產生器官移植物，作為人疾病模型來研究病因和治療，并且作為生物反應器，以產生具有醫療應用價值的蛋白質。然而，盡管SCNT技術的應用廣泛，但當前SCNT的效率相當低。在豬SCNT中，移植到代孕母豬體內的重構胚胎，僅有1％-5％能發育至出生。不僅如此，許多出生后的克隆仔豬表現異常，這導致克隆效率更加低下。究其原因，研究者普遍認為，是SCNT胚胎容易發生錯誤或不完全重編程造成的。一方面，是因為克隆胚胎核供體細胞的起始表觀遺傳修飾狀態與配子的不同，使得基因異常表，X染色體異常失活。另一方面，卵母細胞質量是影響SCNT胚胎發育能力的重要因素。

發明內容

本公開提供了一種卵母細胞體外培養液及培養方式，來提高卵母細胞體外培養的質量。

根據本公開的一個方面，提供了卵母細胞培養液，該培養液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相對于未成熟的卵泡液，成熟的卵泡液對卵母細胞體外成熟(In vitromaturation,IVM)有積極作用的物質豐度更高，離成熟期越近的卵泡，它的卵泡液越能促進卵母細胞IVM，并改善其質量。且該成熟的卵泡液是來源于體內成熟的卵泡，并是從新鮮卵巢取出的，其卵泡液中營養物質更加豐富，更有利與卵母細胞在體外成熟的培養。

在某些實施方式中，培養液含有體積分數為5-20％的成熟卵泡液。成熟卵泡液濃度并不是越高越好，太高了的卵泡液對于卵母細胞的體外成熟和質量的提升效率不明顯，也會減少成熟卵泡液的使用率，因此5-20％濃度的成熟卵泡液對于卵母細胞體外成熟是合適的。

在某些實施方式中，培養液含有體積分數為5％的成熟卵泡液。由此，5％濃度下的成熟卵泡液相較于5％濃度下的未成熟卵泡液，其卵裂率提高了28.85％，囊胚率提高了73.11％，囊胚細胞數提高了13.32％；且培養自24h時，可降低49.38％的活性氧含量；培養自44h時，可降低30.27％的活性氧含量。

在某些實施方式中，培養液含有體積分數為10％的成熟卵泡液。由此，10％濃度下的成熟卵泡液相較于10％濃度下的未成熟卵泡液，卵裂率提高了29.37％，囊胚率提高了84.36％，囊胚細胞數提高了17.11％；且培養自24h時，可降低53.74％的活性氧含量；培養自44h時，可降低34.94％的活性氧含量。

在某些實施方式中，培養液含有體積分數為15％的成熟卵泡液。由此，15％濃度下的成熟卵泡液相較于15％濃度下的未成熟卵泡液，卵裂率提高了28.27％，囊胚率提高了81.55％，囊胚細胞數提高了16.34％；且培養自24h時，可降低48.12％的活性氧含量；培養自44h時，可降低30.21％的活性氧含量。