[發(fā)明專利]一種人內(nèi)含子源性27堿基microRNA及在調(diào)節(jié)血壓中應(yīng)用

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• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN110846319A
• 公開（公告）日: 2020-02-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 歐和生;楊鵬;羅雪蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12Q1/6883;A61K31/7105;A61P9/12
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 任漱晨

本發(fā)明公開了一種人內(nèi)含子源性27堿基microRNA及在調(diào)節(jié)血壓中應(yīng)用，該人內(nèi)含子源性27堿基microRNA是由eNOS第四內(nèi)含子27堿基重復(fù)子重復(fù)4次產(chǎn)生，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。根據(jù)該序列制備其高表達質(zhì)粒，將其高表達質(zhì)粒與脂質(zhì)體按質(zhì)量比為3：1混合并經(jīng)生理鹽水稀釋，經(jīng)大鼠尾靜脈注入SD大鼠體內(nèi)，證明本發(fā)明的人內(nèi)含子源性27堿基microRNA對大鼠血壓具有調(diào)節(jié)作用，可用于研究高血壓疾病，并最終可用于某些降壓藥物的篩選和制備高血壓早期預(yù)警芯片，具有潛在的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于大鼠尾靜脈注射及基因重組技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種人內(nèi)含子源性27堿基microRNA及在調(diào)節(jié)血壓中應(yīng)用。

背景技術(shù)

高血壓是最常見的心血管疾病，常引起嚴(yán)重的心、腦、腎并發(fā)癥，影響著全球20％～50％的成年人。據(jù)統(tǒng)計，目前我國約有2億高血壓患者，每5個成年人中就1人患高血壓，約占全球高血壓總?cè)藬?shù)的1/5，全球每年有接近760萬的患者死于該病。世界衛(wèi)生組織(WHO)對高血壓定義為：在未使用抗高血壓藥物的情況下，收縮壓≥140mmHg和/或舒張壓≥90mmHg。高血壓又被分為1、2、3級：1)1級高血壓，又稱輕度高血壓，收縮壓140～159mmHg或舒張壓90～99mmHg；2)2級高血壓，又稱中度高血壓，收縮壓160～179mmHg或舒張壓100～109mmHg；3)3級高血壓，又稱重度高血壓，收縮壓≥180mmHg或舒張壓≥110mmHg。值得關(guān)注的是，美國心臟協(xié)會在2017年底修改高血壓標(biāo)準(zhǔn)為收縮壓≥130mmHg和/或舒張壓≥80mmHg,顯示高血壓的防治越來越引起高度重視；按照修改后的高血壓標(biāo)準(zhǔn)，全球高血壓患者的數(shù)目至少將翻一倍以上。

miRNA是一類在進化上高度保守、長約17～25個核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分子RNA。迄今為止，在人類基因組中已經(jīng)鑒定出了超過1000個在各種特定的組織中表達的miRNA，這些miRNA調(diào)節(jié)人類近一半的蛋白質(zhì)編碼基因；自1993年第一個miRNA(lin-4)被發(fā)現(xiàn)以來，迄今已在226種不同生物體中鑒定出28645個miRNA前體發(fā)夾結(jié)構(gòu)及35828個成熟的miRNAs。miRNAs通過降解靶基因mRNA或抑制其翻譯來調(diào)控對蛋白表達，控制細胞分化、增殖和調(diào)亡等病生理過程，參與癌癥、糖尿病、心血管疾病等人類重大疾病的相關(guān)基因表達調(diào)節(jié)。

目前認(rèn)為miRNA分為兩大類：基因間隔miRNA和基因內(nèi)含子源性miRNA，后者約占10％，來源于某些編碼蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mRNA前體序列中的內(nèi)含子。內(nèi)含子的發(fā)現(xiàn)和定義最早可追溯到1977年，幾乎所有的真核細胞基因的mRNA前體物中的內(nèi)含子在mRNA編輯過程中都要被剪切，因而長期以來內(nèi)含子被認(rèn)為是“多余的無用的”垃圾RNA序列。盡管也有一些研究發(fā)現(xiàn)它的基因調(diào)節(jié)作用，例如某些核蛋白的結(jié)合位點的在內(nèi)含子部位，在p53依賴性基因激活和轉(zhuǎn)錄中起著重要作用，但直到近年來miRNA的發(fā)現(xiàn)，這些具有很強基因表達調(diào)節(jié)功能的內(nèi)含子序列才被真正重視，并將其歸類為內(nèi)含子源性miRNA；迄今為止，利用生物信息學(xué)方法已鑒定出408種內(nèi)含子源性miRNA，約占人類miRNA總數(shù)的40％。

一氧化氮(NO)在心血管調(diào)節(jié)方面具有十分重要的生物學(xué)作用，它能松弛血管平滑肌、維持器官血流量相對穩(wěn)定、控制各種血管的靜息張力，是主要的血壓調(diào)節(jié)因子。NO以L-精氨酸為底物，由三種不同的NO合成酶(NOS)亞型介導(dǎo)產(chǎn)生：神經(jīng)型(nNOS)、誘導(dǎo)型(iNOS)和內(nèi)皮型(eNOS)。eNOS基因敲除小鼠表現(xiàn)為全身性高血壓，與其在內(nèi)皮依賴性超極化介導(dǎo)的松弛受損相關(guān)。而單次注射裸露人eNOS質(zhì)粒DNA能使SHR大鼠血壓降低5-6周。在受體激動劑的占領(lǐng)，或某些離子通道的開放，導(dǎo)致細胞內(nèi)鈣升高，激活eNOS產(chǎn)生NO。NO-cGMP信號在血管平滑肌細胞舒張和血壓調(diào)節(jié)中的作用在人和動物均得到很好的表征，越來越多的證據(jù)表明，NO信號受損參與高血壓的發(fā)病機制。