[發明專利]一種鑒別非洲豬瘟基因缺失疫苗的試劑、檢測方法及應用

在審

• 申請號: 201911227422.1
• 申請日: 2019-12-04
• 公開（公告）號: CN110872637A
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 林彥星;花群俊;史衛軍;曹琛福;黃超華;花群義;楊俊興;張彩虹;阮周曦
• 申請（專利權）人: 深圳海關動植物檢驗檢疫技術中心;武定縣動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;彭家恩

1.一種鑒別非洲豬瘟基因缺失疫苗的試劑，其特征在于：所述試劑包括三套引物探針組合；

第一套引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.1所示序列，反向引物為Seq ID No.2所示序列，探針為Seq ID No.3所示序列；

第二套引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.4所示序列，反向引物為Seq ID No.5所示序列，探針為Seq ID No.6所示序列；

第三套引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.7所示序列，反向引物為Seq ID No.8所示序列，探針為Seq ID No.9所示序列；

Seq ID No.1：5’-AACGCGTTCGCTTTTCG-3’

Seq ID No.2：5’-CATCGTGGTGGTTATTGTTGGT-3’

Seq ID No.3：5’-ACGTGTCCATAAAACGCAGGTGACCC-3’

Seq ID No.4：5’-GGGTTCGGATACAGGCGTTA-3’

Seq ID No.5：5’-CGTGTTCCTGCCGTGTATCTAA-3’

Seq ID No.6：5’-CCTCCCAGTTCCGCACACAGCC-3’

Seq ID No.7：5’-GAAGAACAATGTCAGCATGATGA-3’

Seq ID No.8：5’-ACTGTAAGGCTTAGGAAGTAATGGTT-3’

Seq ID No.9：5’-ACCACTTCCATACATGAACCATCTCCCA-3’

其中，Seq ID No.3所示序列的第一套引物探針組合的探針、Seq ID No.6所示序列的第二套引物探針組合的探針，及Seq ID No.9所示序列的第三套引物探針組合的探針，三條探針的5’端修飾不同的熒光基團，3’末端修飾熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于：所述Seq ID No.3所示序列的第一套引物探針組合的探針中，5’端修飾6-FAM，3’末端修飾BHQ1；所述Seq ID No.6所示序列的第二套引物探針組合的探針中，5’端修飾Cy5，3’末端修飾BHQ2；所述Seq ID No.9所示序列的第三套引物探針組合的探針中，5’端修飾VIC，3’末端修飾BHQ1。

3.根據權利要求1或2所述的試劑在制備非洲豬瘟基因缺失疫苗檢測的試劑盒或基因芯片中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：所述非洲豬瘟基因缺失疫苗為MGF_360-14L基因和/或CD2v(EP402R)基因缺失的非洲豬瘟疫苗。

5.一種鑒別非洲豬瘟基因缺失疫苗的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求1或2所述的試劑。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還含有用于實時熒光PCR的試劑。

7.一種非洲豬瘟基因缺失疫苗的檢測方法，其特征在于：包括采用權利要求1或2所述的試劑，或者權利要求5或6所述的試劑盒，對待測樣品進行實時熒光PCR檢測，根據檢測結果判斷是否為非洲豬瘟基因缺失疫苗。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于：所述實時熒光PCR檢測為三重實時熒光PCR檢測，所述判斷是否為非洲豬瘟基因缺失疫苗的具體方法為，第一套引物探針組合、第二套引物探針組合和第三套引物探針組合都有擴增信號，則判斷為野毒株；第一套引物探針組合有擴增信號，而第二套引物探針組合和第三套引物探針組合中的至少一個沒有擴增信號，則判斷為非洲豬瘟基因缺失疫苗。