[發明專利]基于ES-DMA-CPC的高準確度蛋白質標準物質定值方法

有效

• 申請號: 201911225128.7
• 申請日: 2019-12-04
• 公開（公告）號: CN110873683B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 米薇;胡志上;劉洋;武利慶;王晶
• 申請（專利權）人: 中國計量科學研究院
• 主分類號: G01N15/02
• 分類號: G01N15/02;G01N15/10
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 李厚銘

本發明公開了一種基于ES?DMA?CPC的高準確度蛋白質標準物質定值方法，包括如下步驟：1)準備待測目標蛋白；2)待測蛋白樣品用乙酸銨緩沖液稀釋；3)配制蔗糖溶液，樣品通過進樣泵注入電噴霧氣溶膠發生器中，通過25μm內徑的毛細管產生霧化的高電荷液滴，液滴蒸發干燥后，帶電粒子通過差分電遷移率納米柱；使用蔗糖溶液進行液滴尺寸計算；4)將蛋白樣品分別通過進樣泵注入電噴霧氣溶膠顆粒發生器中，通過25μm內徑的毛細管產生霧化的高電荷液滴，液滴蒸發干燥后，帶電粒子通過差分電遷移率分析，由粒子計數器獲得蛋白樣品的粒徑分布；5)線性回歸擬合獲得單體Cp₁和二聚體Cp₂的絕對數濃度，然后確定三聚體濃度Cp₃；求和來確定待測目標蛋白質樣品的原始濃度。

技術領域

本發明涉及生物化學檢測技術領域，特別是涉及一種高準確度蛋白質標準物質定值方法。

背景技術

對通過均勻性、穩定性檢驗合格樣料的特性值進行測量，在標準物質技術領域稱為表征化(原文為characterize，即對材料特性進行測量)；由計量權威部門對表征化獲得的樣料特性的量值進行計量學溯源性(以下簡稱溯源性)確認和相應測量不確定度評定合理性確認，在標準物質技術領域稱為定值(原文為certify，即對測量獲得的結果進行認證確認，在其它技術領域一般稱為認證)。因此，對有證標準物質的定值，實際上應分為兩步：首先是對經過均勻性、穩定性檢驗合格的樣料特性值進行測量，也就是表征化；然后是對測量結果的溯源性和測量不確定度評定的合理性進行有效性確認。

隨著生命科學和生物產業的發展，蛋白質標準物質的應用越來越廣泛，需求也越來越大。蛋白質含量標準物質被廣泛應用于農業、食品、臨床等各個領域，蛋白質的準確測量關系到國家安全、大眾健康和貿易公平，在臨床檢驗、生物醫藥等重要領域起著關鍵作用。面對動態的生命活動過程，識別和測定蛋白質這一復雜的生物大分子，認識其生理功能是非常艱巨的和繁重的工作。蛋白質含量的計量需要建立蛋白質含量相應的量值溯源與傳遞體系，使得多肽和蛋白質含量測定能夠溯源到SI單位，保證蛋白質含量測定的準確、可比。然而，目前蛋白質溯源鏈較長，定值結果不確定度大，仍需要完善提升已有方法并建立全新的基、標準裝置和基、標準方法，降低蛋白質測定結果的不確定度。

IDMS是應用穩定同位素進行化學分析的一種方法，在測定蛋白質含量時，該方法將一定量的同位素標記化合物添加到樣品中，這些同位素標記化合物可以是同位素標記的元素、氨基酸、肽段或蛋白質。待同位素與樣品混合均勻后進行水解或酶解的操作，再通過質譜技術檢測反應后非標記物和標記物的比例，由此對蛋白質進行準確定量。該方法現在是蛋白質標準物質定值的主要技術手段之一。同位素稀釋質譜測定過程中需要將蛋白質分解成小分子如氨基酸或者肽段以后進行測定，在水解或者酶解過程中，可能引入一定的不確定度。同位素稀釋質譜法依賴于氨基酸、肽段標準物質進行SI溯源，溯源鏈較長，無法直接溯源到SI單位。

另外，對于大分子量、結構復雜的蛋白質，很難將其完全水解或酶切成小分子，因此對于這類蛋白質同位素稀釋質譜法定量精度不足，誤差較大。

因此，建立一種能夠不依賴內標、外標，可直接對目標蛋白進行準確定量的標準物質定值方法，特別是提升對于結構復雜、大分子量蛋白質定量研究能力是十分必要和迫切的。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于ES-DMA-CPC的高準確度蛋白質標準物質定值方法，在測定蛋白質含量過程中不依賴于蛋白質標準品，提高了大分子量、結構復雜蛋白質的準確定量能力，同時測定結果可以直接溯源到SI單位，可以為蛋白質標準物質準確定值。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案具體如下：