[發(fā)明專利]一種能高效制備且應(yīng)用安全的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911212444.0
• 申請日: 2019-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN112980886B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建強(qiáng);何晉元;王琳;牛星;巴敏;王慶龍
• 申請（專利權(quán)）人: 河北森朗生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

本發(fā)明公開了一種能高效制備且應(yīng)用安全的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種慢病毒重組載體，其含有CAR結(jié)構(gòu)編碼序列和驅(qū)動(dòng)所述CAR結(jié)構(gòu)編碼序列表達(dá)的啟動(dòng)子MND；所述啟動(dòng)子MND的核苷酸序列為序列1第2838?3236位。本發(fā)明為了克服當(dāng)前CAR T治療過程中的轉(zhuǎn)染效率低和產(chǎn)生細(xì)胞因子量大的缺點(diǎn)，通過改善啟動(dòng)子對(duì)CAR結(jié)構(gòu)的啟動(dòng)，即用MND啟動(dòng)子啟動(dòng)CAR結(jié)構(gòu)，制備出新的嵌合抗原受體，并制備表達(dá)該嵌合抗原受體的T細(xì)胞，該T細(xì)胞具有影響CAR分子在細(xì)胞表面表達(dá)較少的特性，與CD19陽性細(xì)胞結(jié)合時(shí)，有著使細(xì)胞殺傷作用較緩和的優(yōu)點(diǎn)，如此可大大降低細(xì)胞因子風(fēng)暴的發(fā)生，有效提高了安全性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能高效制備且應(yīng)用安全的嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

CAR-T療法就是嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法，英文全稱Chimeric AntigenReceptor T-Cell Immunotherapy。這是一種治療腫瘤的新型精準(zhǔn)靶向療法，近幾年通過優(yōu)化改良在臨床腫瘤治療上取得很好的效果，是一種非常有前景的，能夠精準(zhǔn)、快速、高效，且有可能治愈癌癥的新型腫瘤免疫治療方法。

盡管CAR-T在臨床效果上取得了巨大的成功，其商業(yè)化推廣上仍有不小的問題：其一，價(jià)格昂貴，諾華的KymriahTM上市定價(jià)高達(dá)47.5萬美元，支付方式可以創(chuàng)新，生產(chǎn)制備成本卻因無法規(guī)模化而居高不下。影響生產(chǎn)成本的因素有很多，其中轉(zhuǎn)染率低是很重要的一個(gè)原因，并且在通用性CAR-T中依然會(huì)面臨轉(zhuǎn)染效率低的問題，提高轉(zhuǎn)染效率可以有效促進(jìn)臨床級(jí)別細(xì)胞生產(chǎn)的工藝開發(fā)，顯著降低制備成本；其二，一些施用CAR-T細(xì)胞療法的患者會(huì)發(fā)生危險(xiǎn)且有時(shí)常常是危及生命的副作用，該副作用稱為細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS)或細(xì)胞因子風(fēng)暴，其中輸注的活化T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子快速且大量釋放到血流中的全身炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致危險(xiǎn)的低血壓，高燒和寒戰(zhàn)。在嚴(yán)重的CRS情況下，患者會(huì)發(fā)生生命危險(xiǎn)。

針對(duì)CAR-T轉(zhuǎn)染效率低制備成本高問題，目前常規(guī)解決辦法是為采用合適的轉(zhuǎn)染試劑、保持最佳的細(xì)胞狀態(tài)或選擇最佳的轉(zhuǎn)染方法；但是這些改變轉(zhuǎn)染效率還是低，制備成本還是高。

關(guān)于施用CAR-T細(xì)胞療法的患者的細(xì)胞因子風(fēng)暴副作用產(chǎn)生，目前研究發(fā)現(xiàn)，CAR-T細(xì)胞上CAR分子的數(shù)量會(huì)嚴(yán)重影響到對(duì)靶細(xì)胞的結(jié)合效率與活化效率；如果CAR分子表達(dá)效率低，可能導(dǎo)致CAR-T細(xì)胞不能有效活化，從而影響治療效果；但是細(xì)胞表面的CAR分子密度過高，在治療過程中反應(yīng)強(qiáng)度激烈，會(huì)導(dǎo)致大量的細(xì)胞因子產(chǎn)生，提高細(xì)胞因子風(fēng)暴(CRS)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

因此，尋求一種可以高效低成本制備且在治療同時(shí)可以降低細(xì)胞因子風(fēng)暴的抗原受體T細(xì)胞是目前急需要解決的難題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種慢病毒重組載體。

本發(fā)明提供的慢病毒重組載體，其含有CAR結(jié)構(gòu)編碼序列和驅(qū)動(dòng)所述CAR結(jié)構(gòu)編碼序列表達(dá)的啟動(dòng)子MND；

所述啟動(dòng)子MND的核苷酸序列為序列1第2838-3236位；

所述CAR結(jié)構(gòu)依次包括胞外結(jié)合結(jié)構(gòu)域、一個(gè)或多個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域或間隔結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、一個(gè)或多個(gè)胞內(nèi)共刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域以及初級(jí)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。