[發(fā)明專利]一種利用水楊酸促進(jìn)杉木體胚發(fā)生的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911196614.0
• 申請(qǐng)日: 2019-11-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110896859B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳金慧;陸葉;郭玉琳;施季森;黃世清;成鐵龍;胡向陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京申云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用水楊酸促進(jìn)杉木體胚發(fā)生的方法，屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所提供的方法具體為：以DCR為基本培養(yǎng)基，附加有濃度不超過(guò)8mg/L的水楊酸作為杉木體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基；通過(guò)杉木未成熟球果獲得未成熟種胚，將其放在在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)25～30天獲得杉木胚性胚柄團(tuán)；將所得杉木胚性胚柄團(tuán)放入杉木體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)，誘導(dǎo)促進(jìn)杉木體胚發(fā)生，23℃條件下，培養(yǎng)60～100天，即可得到比對(duì)照數(shù)目最高可達(dá)2倍以上的體胚，大大提高了杉木體胚的誘導(dǎo)效率，具有很好的實(shí)用性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，涉及一種利用水楊酸促進(jìn)杉木體胚發(fā)生的方法。

背景技術(shù)

杉木(Cunninghina lanceolata)隸屬于杉科杉木屬，是我國(guó)重要用材樹種之一，其生長(zhǎng)快、干形通直圓滿，材質(zhì)輕軟細(xì)致，易加工，紋理美觀，有特殊香氣，不翹不裂，抗蛀耐腐，是建筑、家具、橋梁、造船、造紙及木纖維等工業(yè)的優(yōu)良原材料。目前，主要通過(guò)三種途徑繁殖杉木種苗：種子、扦插和傳統(tǒng)組織培養(yǎng)[溫亞鋒.基于未成熟合子胚的杉木胚性組織誘導(dǎo)和繼代的研究[D].福建農(nóng)林大學(xué)，2011.]，但是良種種子產(chǎn)量、種子播種品質(zhì)不穩(wěn)定，第2代以上高級(jí)良種供應(yīng)不足，且種子播種品質(zhì)差，尤其是種子澀粒多，通常占重量的40％～60％[鄭仁華.杉木遺傳育種研究進(jìn)展與對(duì)策[J].世界林業(yè)研究，2005(03)：63-65.]；而扦插育苗則受到母樹穗條的多少、場(chǎng)地空間及生根率等方面的限制，其規(guī)模很難滿足現(xiàn)代林業(yè)生產(chǎn)對(duì)杉木種苗的大量需求；此外，傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)根的誘導(dǎo)較為困難，誘導(dǎo)出的根數(shù)量少且弱，在一定程度上影響了苗木質(zhì)量和造林的成功率。因此建立高效率的杉木未成熟胚的胚胎發(fā)生體系，有利于加快杉木速生優(yōu)苗的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

體細(xì)胞胚發(fā)生屬于無(wú)性繁殖技術(shù)，生產(chǎn)出的種苗遺傳背景差異小，苗木整齊。與扦插和傳統(tǒng)組織培養(yǎng)相比，其規(guī)模更大、成本更低。然而，作為裸子植物的杉木，體胚的發(fā)生與被子植物的體細(xì)胞胚發(fā)生有著完全不同的途徑和機(jī)理，成熟的種子以及由種子發(fā)育而來(lái)的植株，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕咝约?xì)胞十分困難。但在針葉樹種中，雌配子體受精后發(fā)育成種子的過(guò)程中有一部分珠心細(xì)胞處于未分化的階段，在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下，可以利用裂生多胚特性，誘導(dǎo)體胚形成。Gupta等(1985，1995)報(bào)道過(guò)利用這一生物學(xué)特性，誘導(dǎo)出花旗松(Pseudotsuga menziesii)和濕地松(Pinuselliottii)的體胚，其大致可以分為四個(gè)步驟：胚性胚柄細(xì)胞團(tuán)(ESM：Embryogenesissuspensor mass)的誘導(dǎo)、保持和增殖、體胚的成熟、萌發(fā)和植株再生，并證明該技術(shù)體系具有達(dá)到產(chǎn)業(yè)化的前景。

然而，目前雖有采用杉木未成熟胚誘導(dǎo)體胚發(fā)生的報(bào)道，但是只能在外植體上形成個(gè)別體細(xì)胞胚，存在誘導(dǎo)率低、數(shù)量少的問(wèn)題，難以在生產(chǎn)上應(yīng)用。因此建立高效率的杉木未成熟胚的胚胎發(fā)生體系，有利于加快杉木速生優(yōu)苗的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。已有研究表明水楊酸對(duì)不同植物的體胚發(fā)生具有不同的效果，其中的機(jī)理還待進(jìn)一步探索，但目前未見(jiàn)將其應(yīng)用于杉木體胚發(fā)生的報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種利用水楊酸促進(jìn)杉木體胚發(fā)生的方法，能夠提高杉木體胚誘導(dǎo)效率。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種利用水楊酸促進(jìn)杉木體胚發(fā)生的方法：取杉木胚性胚柄團(tuán)加入體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)，誘導(dǎo)促進(jìn)杉木體胚發(fā)生；其中，體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以DCR為基本培養(yǎng)基，附加有濃度不超過(guò)8mg/L的水楊酸。

所述的體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包括：1mg/L VC，0.45g/L谷氨酰胺，0.5g/L水解酪蛋白，2～4g/L Ac，2.8g/L水晶洋菜，0.2g/L天冬酰胺，0.2g/L脯氨酸，100～200g/L PEG，1～5mg/L GA，2～8mg/LABA。

所述的水楊酸，其濃度為2～8mg/L。

所述的水楊酸，其濃度為6mg/L。