[發(fā)明專利]一種嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和細(xì)胞藥物

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911193762.7
• 申請(qǐng)日: 2019-11-28
• 公開（公告）號(hào): CN112852741A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江文正;高堯鑫;何聰;劉明耀;席在喜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東師范大學(xué);上海邦耀生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867;C12N15/90;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

1.一種嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體T細(xì)胞表達(dá)靶向腫瘤相關(guān)抗原的嵌合抗原受體且所述嵌合抗原受體T細(xì)胞的4.1R基因被敲除或其表達(dá)受到抑制。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述4.1R基因的表達(dá)通過(guò)如下分子中的任意一種或幾種的組合被抑制：shRNA、反義RNA、siRNA和antagomir；或者，所述嵌合抗原受體T細(xì)胞的4.1R基因通過(guò)如下技術(shù)中的任意一種被敲除：CRISPR/Cas9技術(shù)、ZFN技術(shù)和TALEN技術(shù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體T細(xì)胞含有shRNA分子，所述4.1R基因的表達(dá)通過(guò)所述shRNA分子受到抑制。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述shRNA分子的靶序列如SEQ ID NO.1所示；

優(yōu)選地，所述shRNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述腫瘤相關(guān)抗原選自NKG2D配體和CD19中的任意一種；

所述嵌合抗原受體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域能夠特異性結(jié)合所述腫瘤相關(guān)抗原；

優(yōu)選地，當(dāng)所述腫瘤相關(guān)抗原為NKG2D配體時(shí)，所述嵌合抗原受體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)镹KG2D蛋白，或者是選自NKG2D蛋白的具有結(jié)合活性的片段；

當(dāng)所述腫瘤相關(guān)抗原為CD19時(shí)，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)榭笴D19的scFv；

優(yōu)選地，所述NKG2D配體選自MICA、MICB、ULBP1、ULBP 2、ULBP 3、ULBP 4、ULBP 5和ULBP6中的任意一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述腫瘤相關(guān)抗原為NKG2D配體，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)檫x自NKG2D蛋白的胞外段；

優(yōu)選地，所述NKG2D蛋白的胞外段的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，

所述嵌合抗原受體還具有跨膜結(jié)構(gòu)域和共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)；

所述跨膜結(jié)構(gòu)域選自：CD8、CD28、CD33、CD37、CD8α、CD5、CD16、ICOS、CD9、CD22、CD134、CD137、CD154、CD19、CD45、CD4和CD3ε中的一種或多種的跨膜結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域選自CD8的跨膜結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，所述共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)包含共刺激分子的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，所述共刺激分子選自：CD27、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、CD2、CD4、CD5、CD28、CD30、CD40、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB、OX40、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3中的一種或多種；

優(yōu)選地，所述共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)包括4-1BB的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域和CD3ζ的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。

8.一種制備如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞的方法，其特征在于，其包括如下步驟：抑制嵌合抗原受體T細(xì)胞的4.1R基因的表達(dá)或敲除所述嵌合抗原受體T細(xì)胞的4.1R基因。

9.一種細(xì)胞藥物，其特征在于，其含有作為活性成分的如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的嵌合抗原受體T細(xì)胞以及藥學(xué)上可接受的輔料。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的細(xì)胞藥物，其特征在于，所述細(xì)胞藥物用于治療腫瘤；

優(yōu)選地，所述腫瘤選自實(shí)體瘤或非實(shí)體瘤；

優(yōu)選地，所述實(shí)體瘤為特異性表達(dá)NKG2D配體的腫瘤；

優(yōu)選地，所述實(shí)體瘤選自胰腺癌、肝癌、直腸癌、胃癌和乳腺癌中的任意一種；

優(yōu)選地，所述非實(shí)體瘤選自特異性表達(dá)CD19的腫瘤；

優(yōu)選地，所述非實(shí)體瘤為淋巴瘤。