[發(fā)明專利]一種禽傳染性支氣管炎QX型病毒野毒與疫苗毒的鑒別方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911193522.7
• 申請日: 2019-11-28
• 公開（公告）號: CN110747292A
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋姍姍;劉東;劉紅祥;李彬;王群義;張翔;劉豐波;任衍倍;杜元釗
• 申請（專利權(quán)）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 37201 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 曾慶國

本發(fā)明提供了一種禽傳染性支氣管炎QX型野毒株與疫苗毒株的鑒別引物和鑒別方法，本發(fā)明利用禽傳染性支氣管炎QX型野毒與疫苗毒的序列差異，篩選出特異性的4條引物序列，建立鑒別QX型禽傳染性支氣管炎野毒和疫苗毒的雙重RT?PCR方法。本發(fā)明所述鑒別方法無需依賴深厚的專業(yè)背景，也無需借助昂貴的精密儀器，具有準確快捷、客觀公正、經(jīng)濟實用的特點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種禽傳染性支氣管炎QX型病毒野毒與疫苗毒的鑒別方法。

背景技術(shù)

傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis IB)是由傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus IBV)引起雞的一種急性、高度接觸性的病毒性傳染病，是當前危害養(yǎng)禽業(yè)最為嚴重的病毒性傳染病之一。

IBV的血清型很多，而且新的血清型和變異株仍在不斷出現(xiàn),近年來QX型的IBV在我國雞群中廣泛流行，成為主要的流行毒株,為有效預(yù)防和控制該病的流行，雞群免疫QX型疫苗，但是由于IBV血清型眾多，而且無論是在免疫雞群還是非免疫雞群中，均可以檢測到IBV毒株的流行，對于QX型野毒和疫苗毒感染缺乏有效的鑒別診斷方法。

目前國內(nèi)外均沒有可以鑒別診斷QX型疫苗株和野毒株感染的方法，難以對雞群感染IBV基因型情況進行鑒定檢測，這已成為目前影響動物防疫的一大難題，急需解決。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種禽傳染性支氣管炎QX型病毒野毒與疫苗毒的鑒別方法，以及使用的引物組，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明首先提供用于區(qū)別禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株與疫苗型病毒株的分子片段，以及區(qū)別于其他IBV，QX型IBV通用的分子片段。通過測得QX型疫苗型病毒株基因組全長序列以及目前流行的QX型野生型病毒株序列與GenBank上其他基因型IBV進行比對分析，找到禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株與疫苗型病毒株有差異的分子片段；通過GenBank中其他基因型IBV序列與QX型IBV序列比對分析，找到QX型IBV通用的分子片段，

其中禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株的分子片段為SEQ ID NO:1；

禽傳染性支氣管炎QX型病毒疫苗型病毒株的分子片段為SEQ ID NO:2；

禽傳染性支氣管炎QX型病毒通用的分子片段：SEQ ID NO:3；

本發(fā)明還提供一種用于檢測禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株與疫苗型病毒株的的制品，所述的制品用于檢測上述的分子標記；

所述的制品，優(yōu)選為PCR擴增檢測試劑盒或測序試劑盒。

本發(fā)明還提供用于區(qū)別禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株與疫苗型病毒株的引物對，所述的引物對用于檢測上述區(qū)別禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株與疫苗型病毒株的分子片段；

其中一種具體的引物對的序列如下：

針對QX疫苗毒的上游引物：YM-F:ATACCGCCACCTGATGTTGT(SEQ ID NO:4)、

針對QX疫苗毒的下游引物：YM-R:TTTGAGCGTGTTCCTGTTGAC(SEQ ID NO:5)、

針對QX型IBV的上游引物：YD-F:AGTAGTGGTAGCGGGTCTTG(SEQ ID NO:6)、

針對QX型IBV的上游引物：YD-R:ACACACCTGCTGACGTAAC(SEQ ID NO:7)。

本發(fā)明還提供一種區(qū)別禽傳染性支氣管炎QX型病毒野生型病毒株與疫苗型病毒株的方法，是通過上述的引物組來進行PCR擴增檢測。