[發(fā)明專利]一種能被馬氏珠母貝SMAD1/5基因抑制的MSX啟動(dòng)子及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911192577.6
• 申請日: 2019-11-28
• 公開（公告）號: CN110904105B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石禹;何毛賢
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/66;C12N15/85;C12N15/52
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣;劉明星

本發(fā)明公開了一種能被馬氏珠母貝SMAD1/5基因抑制的MSX啟動(dòng)子及其應(yīng)用。該啟動(dòng)子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明通過基因組步移法擴(kuò)增得到MSX啟動(dòng)子序列，本發(fā)明的MSX啟動(dòng)子具有能夠與SMAD1/4基因結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)1、結(jié)合位點(diǎn)2結(jié)合位點(diǎn)3、結(jié)合位點(diǎn)4。通過構(gòu)建不同突變位點(diǎn)的MSX啟動(dòng)子的野生型和突變型載體，應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)鑒定SMAD1/5基因主要通過結(jié)合位點(diǎn)2作用于MSX啟動(dòng)子。本發(fā)明的能被馬氏珠母貝SMAD1/5基因抑制的MSX啟動(dòng)子從而啟動(dòng)殼基質(zhì)蛋白的表達(dá)，從而促進(jìn)珍珠或珍珠貝的生長。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)科學(xué)和基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能被馬氏珠母貝SMAD1/5基因抑制的MSX啟動(dòng)子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

馬氏珠母貝是一種重要的海水養(yǎng)殖貝類和生產(chǎn)珍珠的主要母貝，由于其廣泛地用來培育珍珠，具有極大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在我國，該物種主要分布于南方廣東、廣西和海南的沿海，每年的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)值達(dá)10億元以上。而珍珠是一種典型的經(jīng)生物礦化過程而形成的納米材料；同時(shí)，由于其迷人的殼結(jié)構(gòu)，使馬氏珠母貝成為了最好的研究生物礦化的對象。貝殼的生物礦化已被證實(shí)是受基因精確表達(dá)與調(diào)控的過程，而由外套膜表皮細(xì)胞分泌的基質(zhì)蛋白在調(diào)控殼的生長和礦化過程中起著重要的作用(Zhang et al，2006；Mariea et al，2012)。

BMP2-SMADs信號通路高度保守，從真后生動(dòng)物到哺乳動(dòng)物均有發(fā)現(xiàn)。SMAD1/5轉(zhuǎn)導(dǎo)的BMP2信號通路是誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化和骨形成的有效親骨因子，在胚胎發(fā)生、個(gè)體形成、非對稱器官的形成過程中也具有重要作用。MSX基因在胚胎發(fā)育過程中是牙齒和骨骼發(fā)育重要的調(diào)節(jié)因子，通過BMP-SMADs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用，在脊椎動(dòng)物礦化過程中發(fā)揮重要且復(fù)雜的調(diào)控作用。綜合目前的研究進(jìn)展，無脊椎動(dòng)物的BMP2-SMADs信號通路的分子具有結(jié)構(gòu)和功能上的原始性和保守性，但軟體動(dòng)物中為數(shù)不多的研究還多集中于配體的研究，與模式生物中對SMADs的大量研究相比，軟體動(dòng)物中對此重要信號分子SMAD1/5的研究還非常少，對SMAD1/5轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及對生物礦化過程的調(diào)控還不清楚。對該問題的解析將加深我們對此信號通路的了解及對生物礦化這類生命現(xiàn)象的認(rèn)識(shí)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種能被馬氏珠母貝SMAD1/5基因抑制的MSX啟動(dòng)子。

本發(fā)明的能被馬氏珠母貝SMAD1/5基因抑制的MSX啟動(dòng)子，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。提取馬氏珠母貝基因組DNA，根據(jù)已有的MSX基因序列設(shè)計(jì)特異引物1(5′-TCTATAATATGAAACTTAAA-3′)和引物2(5′-AAGTTCATCCGTGCGGATATTTGG-3′)，用基因組步移法擴(kuò)增得到MSX啟動(dòng)子序列，全長546bp，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測序后，采用TRANSFAC網(wǎng)站預(yù)測結(jié)合位點(diǎn)和核心序列，本發(fā)明的MSX啟動(dòng)子與SMAD1/5基因的結(jié)合位點(diǎn)1序列為GTCT，與SMAD1/5基因的結(jié)合位點(diǎn)2序列為GTCT，與SMAD1/5基因的結(jié)合位點(diǎn)3序列為GTCT，與SMAD1/5基因的結(jié)合位點(diǎn)4序列為GCCGTGACG。