[發(fā)明專(zhuān)利]一種人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911187477.4
• 申請(qǐng)日: 2019-11-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110964818A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅鋒;韓勛領(lǐng);孫松松
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 重慶浦洛通基因醫(yī)學(xué)研究院有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 重慶華科專(zhuān)利事務(wù)所 50123
• 代理人: 康海燕

1.一種人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒，包括用于檢測(cè)BRAF基因V600E突變的引物和探針、抑制劑、內(nèi)控引物及探針、外控引物及探針，其特征在于：檢測(cè)引物為SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2，檢測(cè)探針為SEQ ID NO.3；抑制劑為SEQ ID NO.4；內(nèi)控引物為SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6，內(nèi)控?zé)晒馓结槥镾EQ ID NO.7；外控引物為SEQ ID NO.8和SEQ IDNO.9，外控?zé)晒馓结槥镾EQ ID NO.10。

2.如權(quán)利要求1所述的人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒，包括PCR反應(yīng)液，陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。

3.如權(quán)利要求1或2所述的人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒，PCR反應(yīng)液包含了熱啟動(dòng)taq酶、緩沖液、鎂離子、dNTP。

4.如權(quán)利要求1、2或3所述的人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒，陽(yáng)性質(zhì)控序列為SEQ ID NO.11，陰性質(zhì)控為水。

5.采用權(quán)利要求1-4任一所述的人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，包括實(shí)時(shí)熒光定量PCR和突變擴(kuò)增PCR系統(tǒng)(Arms-PCR)聯(lián)合的PCR擴(kuò)增。

6.采用權(quán)利要求5所述的人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，所述PCR擴(kuò)增條件為：

預(yù)變性的條件為：95℃，2分鐘；

PCR擴(kuò)增第一階段由5個(gè)擴(kuò)增循環(huán)構(gòu)成，其條件為：變性：95℃，15秒；退火：60℃，20秒；延伸：72℃，20秒；

PCR擴(kuò)增第二階段由40個(gè)擴(kuò)增循環(huán)構(gòu)成，其條件為：變性：95℃，15秒；退火：60℃，20秒，設(shè)置熒光信號(hào)采集；延伸：72℃，20秒。

7.采用權(quán)利要求1所述的人類(lèi)BRAF基因V600E突變的檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，包括判讀步驟，所述判讀是在PCR反應(yīng)體系和循環(huán)程序條件下，觀(guān)察BRAF基因V600E突變的熒光檢測(cè)信號(hào)是否形成對(duì)數(shù)擴(kuò)增“S”型曲線(xiàn)；如果形成對(duì)數(shù)擴(kuò)增“S”型曲線(xiàn)，該待檢測(cè)樣本含有V600E突變。