[發明專利]CAR-T細胞和檢測方法

在審

• 申請號: 201911181105.0
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN112852740A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 王保壘;彭亮;都曉龍;王先進;葉立軍;張嘉美
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物治療股份有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;G01N33/68;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發明公開了一種CAR?T細胞和檢測方法，涉及CAR?T細胞技術領域。該CAR?T細胞能夠分泌目標抗體，目標抗體的N端或C端融合有檢測標簽。本發明公開的CAR?T細胞其分泌的抗體可以被定量檢測，為評估與監測CAR?T分泌抗體的量與其療效的關系提供了基礎和保證。

技術領域

本發明涉及CAR-T細胞技術領域，具體而言，涉及一種CAR-T細胞和檢測方法。

背景技術

PD-1(Programmed Cell Death Protein)程序性死亡受體-1，主要表達在B祖細胞，活化的T細胞和B細胞表面，是免疫檢查站點家族的成員之一。研究發現，腫瘤細胞會通過表達PD-1的配體PD-L1來逃避免疫系統的監護，當腫瘤細胞通過其表面的PD-L1與T細胞表面的PD-1結合時，PD-1會在免疫受體復合物附近募集大量的酪氨酸磷酸酶SHP2，造成TCR相關信號的去磷酸化從而削弱TCR信號通路，進而造成T細胞的耗竭。

嵌合抗原受體T細胞免疫療法，簡稱CAR-T技術，是通過體外改造病人的T細胞，使病人的T細胞具備識別腫瘤細胞的能力，體外擴大培養后回輸到病人體內進行治療的一種方法。目前，以CD19為靶點的CAR-T在治療B細胞血液腫瘤方面取得了巨大的成果，但根據臨床研究結果來看，CD19 CAR-T在治療B細胞淋巴瘤方面的療效遠遠不及在治療B細胞急性淋巴細胞白血病方面的療效，這可能是B細胞淋巴瘤表面表達有大量的PD-L1分子造成的，雖然目前尚未有文獻對B-ALL病人B細胞上PD-L1分子表達水平報道，但是在針對彌漫性大B細胞淋巴瘤的臨床研究中發現病人B細胞淋巴瘤表面的PD-L1分子表達水平與臨床療效直接相關，B細胞淋巴瘤表面PD-L1表達低的病人，在綜合療法、單獨化療和PD-1抗體免疫療法中均有著更高的生存率，與此同時，再對其他靶點實體腫瘤進行治療的過程中，腫瘤細胞也會通過過表達PD-L1來逃避CAR-T對其進行殺傷，提示CD19 CAR-T治療過程中，封閉PD-1/PD-L1信號通路將會最大程度的增加CD19 CAR-T的臨床療效，使患者受益。

運用CAR-T療法聯合PD-1/PD-L1抗體或其他免疫檢查站點家族成員抗體療法在腫瘤治療過程中療效明顯，但是由于腫瘤微環境的存在，到達腫瘤部位的抗體藥物較少，同時由于抗體藥物在體內的動態代謝過程，病人治療成本較大，鑒于此，很多研究者將CAR-T療法與免疫檢查站點療法聯合使用，生產出能分泌PD-1/PD-L1單鏈抗體的CAR-T，得到了積極的實驗結果。

在分泌PD-1/PD-L1單鏈抗體的CAR-T在應用中，通常需要對其分泌的單鏈抗體進行定量，以便能夠合理地控制用量范圍。然而，目前缺乏對這類可分泌抗體的CAR-T細胞類型所分泌的抗體進行有效定量檢測的手段。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種CAR-T細胞和檢測方法。本發明提供的CAR-T細胞其可以分泌抗體，且分泌的抗體可以被定量檢測，本發明提供的檢測方法可以有效地定量檢測CAR-T細胞分泌的抗體。

本發明是這樣實現的：

第一方面，本發明實施例提供一種CAR-T細胞，上述CAR-T細胞能夠表達嵌合抗原受體和分泌目標抗體，上述目標抗體的N端或C端融合有檢測標簽，上述檢測標簽能夠被檢測抗體特異性識別和結合，以對上述目標抗體進行定量檢測，所述檢測抗體標記有信號指示劑。

本發明提供的CAR-T細胞能夠表達嵌合抗原受體和分泌抗體，所分泌的抗體的N端或C端融合了檢測標簽，檢測標簽可以被檢測抗體特異性識別和結合，這樣，利用檢測抗體與檢測標簽的特異性結合原理，再通過對檢測抗體上的信號指示劑的信號強度檢測，將信號強度值代入匹配的標準曲線公式中，即可定量確定CAR-T細胞所分泌的抗體含量。本發明為評估與監測病人血清中或腫瘤微環境中CAR-T分泌抗體的量與療效的關系提供了基礎和保證。