[發明專利]犬腺病毒II型、犬瘟熱病毒、犬細小病毒和犬副流感病毒的四重實時熒光定量PCR檢測

在審

• 申請號: 201911179200.7
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN110846438A
• 公開（公告）日: 2020-02-28
• 發明（設計）人: 王艷杰;魏學峰;劉國英;范秀麗;張貴剛;陳君彥;劉建奇;王秀明;劉亭岐;巨敏瑩;劉東霞
• 申請（專利權）人: 金宇保靈生物藥品有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.用于對犬腺病毒II型(CAV-II)、犬細小病毒(CPV)、犬瘟熱病毒(CDV)和犬副流感病毒(CPIV)進行四重實時熒光定量PCR檢測及鑒別的引物和TaqMan探針組，其特征在于，包含：

用于檢測犬腺病毒II型的上游引物(CAV₂-F)和下游引物(CAV₂-R)，其中所述上游引物(CAV₂-F)的核苷酸序列如SED ID NO：9所示，所述下游引物(CAV₂-R)的核苷酸序列如SED IDNO：10所示；

用于檢測犬腺病毒II型的TaqMan探針(CAV₂-P)，所述TaqMan探針(CAV₂-P)的核苷酸序列如SED ID NO：17所示；

用于檢測犬瘟熱病毒的上游引物(CDV-F)和下游引物(CDV-R)，其中所述上游引物(CDV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：11所示，所述下游引物(CDV-R)的核苷酸序列如SED IDNO：12所示；

用于檢測犬瘟熱病毒的TaqMan探針(CDV-P)，所述TaqMan探針(CDV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：18所示；

用于檢測犬細小病毒的上游引物(CPV-F)和下游引物(CPV-R)，其中所述上游引物(CPV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：13所示，所述下游引物(CPV-R)的核苷酸序列如SED IDNO：14所示；

用于檢測犬細小病毒的TaqMan探針(CPV-P)，所述TaqMan探針(CPV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：19所示；

用于檢測犬副流感病毒的上游引物(CPIV-F)和下游引物(CPIV-R)，其中所述上游引物(CPIV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：15所示，所述下游引物(CPIV-R)的核苷酸序列如SEDID NO：16所示；

用于檢測犬副流感病毒的TaqMan探針(CPIV-P)，所述TaqMan探針(CPIV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：20所示；

所述TaqMan探針為經過熒光標記的，其5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團，且所述TaqMan探針的3’端已經磷酸化處理。

2.根據權利要求1所述的引物和TaqMan探針組，其特征在于，

所述TaqMan探針(CAV₂-P)的5’端標記有Quasar 705熒光報告基團，3’端標記有BHQ3熒光淬滅基團；

所述TaqMan探針(CDV-P)的5’端標記有Cy5熒光報告基團，3’端標記有BHQ2熒光淬滅基團；

所述TaqMan探針(CPV-P)的5’端標記有FAM熒光報告基團，3’端標記有BHQ2熒光淬滅基團；

所述TaqMan探針(CPIV-P)的5’端標記有HEX熒光報告基團，3’端標記有BHQ2熒光淬滅基團。

3.用于對犬腺病毒II型、犬細小病毒、犬瘟熱病毒和犬副流感病毒進行四重實時熒光定量PCR檢測及鑒別的試劑盒，其特征在于：

包括權利要求1或2所述的引物和TaqMan探針組；

使用所述試劑盒時的25μL實時熒光定量PCR檢測體系中所述引物和TaqMan探針的用量優選為：10μM的4×混合引物Mix 0.75μL，10μM的4×混合探針0.5μL，其中所述4×混合引物為CAV₂-F、CAV₂-R、CDV-F、CDV-R、CPV-F、CPV-R、CPIV-F、CPIV-R的等濃度混合，所述4×混合探針為CAV₂-P、CDV-P、CPV-P、CPIV-P的等濃度混合。