[發明專利]一種快速檢測人體尿液中高香草酸、香草扁桃酸、5-羥基吲哚乙酸及肌酐的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201911170671.1
• 申請日: 2019-11-26
• 公開（公告）號: CN112946150A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 李梓僮;廖云莉;饒維橋;任艷;訾金;林梁
• 申請（專利權）人: 深圳華大臨床檢驗中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 趙靜

1.一種快速同時檢測人體尿液中高香草酸、香草扁桃酸、5-羥基吲哚乙酸及肌酐的方法，包括下述步驟：

1)配制樣本稀釋工作液：將內標稀釋液母液使用超純水稀釋得到；

2)樣本預處理：在避光條件下，取尿液樣本并向其中加入EDTA溶液、Na₂S₂O₃溶液以及乙酸進行酸化，混合均勻得到待測尿液樣本；

3)樣本處理：取待測尿液樣本、校準品、尿液質控品各10μL，加入至各自對應的96深孔板內，然后每孔分別加入190μL樣本稀釋工作液，封膜，渦旋、離心，取上清液采用液相色譜-質譜進行檢測；

其中，所述內標稀釋液母液為含氘代香草扁桃酸標準品、氘代高香草酸標準品、氘代5-羥基吲哚乙酸標準品和氘代肌酐標準品的甲醇溶液；

所述校準品為人工尿液樣品；其組成為人工尿液、香草扁桃酸標準品、高香草酸標準品、5-羥基吲哚乙酸標準品和肌酐標準品；

所述尿液質控品，包括高香草酸標準品、香草扁桃酸標準品、5-羥基吲哚乙酸標準品和肌酐標準品為正常濃度的人工尿液樣品和高香草酸標準品、香草扁桃酸標準品、5-羥基吲哚乙酸標準品和肌酐標準品為異常濃度的人工尿液樣品。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步驟1)中，所述稀釋的倍數為50倍；

其中，所述內標稀釋液母液中所述氘代香草扁桃酸標準品、氘代高香草酸標準品和氘代5-羥基吲哚乙酸標準品的濃度均為100μg/ml，氘代肌酐標準品的濃度為1ug/ml；

所述氘代香草扁桃酸標準品為香草扁桃酸-D3、氘代高香草酸標準品為高香草酸-D5、氘代5-羥基吲哚乙酸標準品為5-羥基吲哚乙酸-D5、氘代肌酐標準品為肌酐-D3。

所述校準品為Cal1-Cal7七個人工尿液樣品；其中Cal1人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為0.5μg/ml、香草扁桃酸的濃度為0.5μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為0.5μg/ml、肌酐的濃度為0.1mg/ml；Cal2人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為1.0μg/ml、香草扁桃酸的濃度為1.0μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為1.0μg/ml、肌酐的濃度為0.2mg/ml；Cal3人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為2.0μg/ml、香草扁桃酸的濃度為2.0μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為2.0μg/ml、肌酐的濃度為0.4mg/ml；Cal4人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為5.0μg/ml、香草扁桃酸的濃度為5.0μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為5.0μg/ml、肌酐的濃度為1.0mg/ml；Cal5人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為10.0μg/ml、香草扁桃酸的濃度為10.0μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為10.0μg/ml、肌酐的濃度為2.0mg/ml；Cal6人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為25.0μg/ml、香草扁桃酸的濃度為25.0μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為25.0μg/ml、肌酐的濃度為5mg/ml；Cal7人工尿液樣品中高香草酸標準品的濃度為50.0μg/ml、香草扁桃酸的濃度為50.0μg/ml、5-羥基吲哚乙酸的濃度為50.0μg/ml、肌酐的濃度為10.0mg/ml；

所述正常濃度人工尿液樣品中，高香草酸標準品濃度為1.2-1.8μg/ml、香草扁桃酸標準品濃度為2.4-3.6μg/ml、5-羥基吲哚乙酸標準品濃度為2.4-3.6μg/ml、肌酐標準品濃度為0.88-1.32mg/ml；

所述異常濃度人工尿液樣品中，高香草酸標準品濃度為12-18μg/ml、香草扁桃酸標準品濃度為11.2-16.8μg/ml、5-羥基吲哚乙酸標準品濃度為20-30μg/ml、肌酐標準品濃度為1.68-2.52mg/ml。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中所述EDTA和Na₂S₂O₃在加入尿液樣本后的最終濃度均為25mg/mL；

所述尿液樣本、EDTA溶液、Na₂S₂O₃溶液、乙酸的配比依次為10mL：100μL：100μL：80μL；

所述步驟3)中，所述渦旋的時間為1分鐘；所述離心的條件為：4000rpm，4℃離心1分鐘。