[發明專利]一種深綠木霉HB20111在防治小麥莖基腐病和紋枯病上的應用

有效

• 申請號: 201911167705.1
• 申請日: 2019-11-25
• 公開（公告）號: CN110915822B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 扈進冬;李紀順;魏艷麗;陳凱;劉寶軍;趙忠娟;楊凱;李玲;王貽蓮;吳遠征;李紅梅;楊合同
• 申請（專利權）人: 山東省科學院生態研究所(山東省科學院中日友好生物技術研究中心)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;A01N63/38;A01P3/00
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 于曉曉

1.一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述應用為防治小麥莖基腐病和紋枯病，所述深綠木霉HB20111的分類命名為深綠木霉Trichoderma atroviride，于2018年12月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No. 16963。

2.如權利要求1所述的一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述深綠木霉HB20111通過對小麥拌種防治土傳真菌病害。

3.如權利要求2所述的一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述應用為采用含有HB20111的生物拌種劑對小麥進行拌種。

4.如權利要求3所述的一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述生物拌種劑的制備方法包括以下步驟：

使用載體對深綠木霉HB20111孢子懸液進行吸附，形成固體菌劑，加入質量分數1%-8%羧甲基纖維素鈉和質量分數1%-5%海藻酸鈉后用攪拌機混勻，調整菌數不低于2.0×10⁸cfu/g，在流化床中50℃干燥至水份含量10%以下。

5.如權利要求4所述的一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述載體包括硅藻土、麥飯石或草炭土。

6.如權利要求4所述的一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述深綠木霉HB20111孢子懸液的制備方法包括以下步驟：

①固體一級種子制備：采用PDA培養基，將深綠木霉HB20111試管菌種接種在試管培養基中，28℃培養，4℃冰箱保存，要求菌絲與分生孢子豐滿，無雜菌；然后接種茄形瓶，采用PDA培養基，28℃培養，菌齡5-10天，要求菌落表面無液態水，菌絲與分生孢子豐滿，無雜菌污染；

②液體種子制備：使用115℃滅菌30分鐘的1%的葡萄糖水沖洗茄瓶表面，將新鮮孢子洗下后稀釋至1×10⁶-1×10⁷孢子/mL作為固體接種的液體種子；

③接種固體培養基：固體培養基的組成包括麥粒和稻殼，所述麥粒和稻殼的質量比為49：5，固體培養基的含水量為70%，FeSO₄為100ppm，121℃滅菌40分鐘后以循環水冷卻，接種量為2%-5%，在混合接種器內將液體種子和固體培養基混合均勻，轉移到固體培養室內培養96-120h；

④制備孢子懸液：將發酵好的固體發酵培養基按培養基與水質量比1：1的比例浸潤至水中，攪拌使固料中的分生孢子分散至水中，過濾去除固體發酵原料，獲得孢子懸液，調整濃度至5.0×10⁹孢子/mL。

7.如權利要求6所述的一種深綠木霉HB20111的應用，其特征在于，所述步驟③的培養條件為：

1）菌絲生長階段：固體培養基厚度控制在5cm以下，料溫控制在30±2℃，室溫控制在25-30℃，空氣的相對含水量控制在95-100%，固體發酵室內配備新風系統，采用室內CO₂濃度反饋調節，培養室的面積根據產能確定；

2)孢子產生階段：料溫控制在30±2℃，培養基表面不能有液態水，空氣的相對濕度不低于90%，定時取樣計算分生孢子數，當每克固體發酵物中分生孢子數達到5×10⁹時即可收獲。