[發明專利]一種高效液相色譜法檢測中生菌素F的方法

在審

• 申請號: 201911156453.2
• 申請日: 2019-11-22
• 公開（公告）號: CN111175389A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 張楠;潘忠成;楊宏勃;高波;陳豪;李蒲民
• 申請（專利權）人: 陜西麥可羅生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 北京五月天專利商標代理有限公司 11294
• 代理人: 吳寶泰

本發明涉及一種高效液相色譜法檢測中生菌素F的方法，采用如下色譜條件：色譜柱：以嵌入極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；流動相：有機相?水相；流速0.5?1.5ml/min，檢測波長190?210nm；柱溫：10?40℃；進樣量：5?20μL；檢測器采用紫外檢測器或二極管陣列檢測器。現有方法均采用生測法進行定量，柱前衍生的方法作為定性方法，本發明通過所述色譜柱和所述流動相的配合使用，取得了很好的分離度，準確度，通過本檢測方法使中生菌素F與結構相似的同系物達到很好的分離，提高了中生菌素F檢測的準確度；該檢測方法中生菌素F出峰時間約8.8min。

技術領域

本發明屬于農藥檢測分析技術領域，具體涉及一種高效液相色譜法檢測中生菌素F的方法。

背景技術

中生菌素，化學名稱為鏈絲菌素（streptothricins），是最早發現的抗生素之一，其中鏈絲菌素F早在1942年即由Waksman的研究小組所發現，但其化學結構一直到1982年才通過人工全合成而最終確定，其中F組分的結構式如下：

中生菌素的化學結構由鏈里定內酰胺、古洛糖胺和賴氨酸側鏈三部分組成，具有殺菌活性的主要成分有7個，根據賴氨酸的數量從1-7分別命名為鏈絲菌素F、E、D、C、B、A和X，其活性高低與賴氨酸的數量呈整相關，即賴氨酸數量越多，活性越強。

中生菌素抗菌譜廣，能抗革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌、分枝桿菌、酵母菌及絲狀真菌，對人畜中等毒性。我國目前有效登記的中生菌素原藥及制劑共有41個品種，其中12%中生菌素原藥登記產品1個，其余40個為可濕性粉劑、顆粒劑及水劑等，且混配制劑占有很大比例，主要用于防治蘋果輪紋病、黃瓜細菌性角斑病、番茄青枯病等病害。

農藥產品質量標準是產品生產、檢驗和評定質量的技術依據，科學有效的產品質量標準是保證農藥實現穩定防治效果的技術保障。農用抗生素與化學合成農藥相比具有原藥含量低、組分復雜等特點，在檢測方法的開發上具有較大的難度。從當前公開資料來看，現行有效的中生菌素產品共有6個產品質量標準，均為企業標準，分別為福建凱立生物制品有限公司的Q/KLSW 013-2018《12%中生菌素母藥》，Q/KL SW033- 2018《3%中生菌素可溶液劑》，Q/KLSW 030-2018《0.5%中生菌素顆粒劑》，福建新農大正生物工程有限公司Q/XNDZ124-2016《3%中生菌素可濕性粉劑》，海利爾藥業集團股份有限公司Q/370202HYJ 373-2018《2.0%四霉素中生菌素水劑》， 四川金珠生態農業科技有限公司Q/73023813-3.7-2017《3%中生菌素水劑》，以上6個企業標準中中生菌素的控制指標均為生物效價。

生物效價作為控制指標在早期的農用和醫用抗生素質量標準中非常普遍,但生物效價法具有很大的局限性，如分析時間長、實驗室間重現性差、人為干擾因素多等。更為致命的是當前中生菌素的混配制劑很多，兩種殺菌活性化合物混合在一起，尤其是與具有抗細菌活性的殺菌劑混配，從理論上來說用生物效價法測定中生菌素含量存在很大的問題，是不準確更是沒有可行性的。

色譜法具有分析時間短、結果重現性好、可實現特定化合物的準確定量等優點，近年用色譜法代替生物效價法已成為抗生素質量標準的趨勢。以上企業標準中均將液相色譜柱前衍生作為中生菌素的鑒別方法，但從方法的技術細節上看存在明顯的缺陷。福建凱立生物制品有限公司的Q/KLSW013-2018《12%中生菌素母藥》中存在兩個明顯缺陷:一是OPA柱前衍生產物不專一，標準中選擇第一個峰進行定量，這具有很大的隨意性，因為這個產物的比例不是固定的，同一樣品反應結果也會存在很大的差異，柱前衍生的要求必須是反應定量進行，產物專一；二是采用熒光檢測，但方法中只是給出檢測波長為360nm，而熒光檢測必須有激發波長和檢測波長兩個關鍵參數。因為農藥產品質量標準中要求必須列出鑒別方法，所以該方法的列入可能主要是滿足企業產品質量標準的形式需求，并不具有實際的可行性。