[發明專利]RNase作用底物和RNase污染檢測方法及應用在審
| 申請號： | 201911154378.6 | 申請日： | 2019-11-22 |
| 公開（公告）號： | CN110714052A | 公開（公告）日： | 2020-01-21 |
| 發明（設計）人： | 趙斯斯;張中娜;王雅欣 | 申請（專利權）人： | 生工生物工程(上海)股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/44 | 分類號： | C12Q1/44;G01N21/64 |
| 代理公司： | 11463 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) | 代理人： | 徐樂 |
| 地址： | 201600 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 作用底物 熒光探針 修飾 分子生物學領域 待檢測樣本 實驗室環境 淬滅基團 莖環結構 實驗物料 污染檢測 熒光基團 單鏈RNA 不對稱 污染量 環部 堿基 莖部 質控 應用 監控 檢測 申請 污染 | ||
1.一種RNase作用底物，其特征在于，所述RNase作用底物為熒光探針，該熒光探針具有莖環結構，環部的序列長度為3-8bp，莖部的序列長度為3-9bp，5’端和3’端具有0-2bp的不對稱堿基；
所述熒光探針的5’端修飾有熒光基團，3’端修飾有淬滅基團。
2.根據權利要求1所述的RNase作用底物，其特征在于，所述RNase作用底物的序列為如下SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.3任一種：
5’-GCUACCUCAUGGUAGC-3’(SEQ ID NO.1)，其中，環部序列為5’-UCAU-3’；
5’-GCUACCUCAUAGUAGC-3’(SEQ ID NO.2),其中，環部序列為5’-CUCAUA-3’；
5’-UCUCACUGUAUUGAGA-3’(SEQ ID NO.3),其中，環部序列為5’-CUGUAU-3’。
3.根據權利要求1所述的RNase作用底物，其特征在于，所述熒光基團包括FAM、HEX、VIC、ROX或Cy5，優選為FAM；
優選地，所述淬滅基團包括BHQ-0、BHQ-1、BHQ-2或BHQ-3，優選為BHQ-1。
4.根據權利要求1-3任一項所述的RNase作用底物在RNase檢測或制備RNase檢測的產品中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述RNase檢測為RNase活力檢測或RNase污染檢測；
優選地，所述產品包括試劑或試劑盒。
6.一種RNase污染檢測方法，其特征在于，將權利要求1-3任一項所述的RNase作用底物加入待檢測樣本進行反應，檢測反應物中的熒光信號值，根據熒光信號值得到待檢測樣本中RNase的含量。
7.根據權利要求6所述的RNase污染檢測方法，其特征在于，檢測反應物中的熒光信號值的方法包括如下a)、b)或c)：
a)熒光定量PCR檢測方法檢測；
b)RNase作用底物和待檢測樣本混勻后35-39℃反應25-35min后，微量熒光分光光度計檢測；
c)RNase作用底物和待檢測樣本混勻后35-39℃反應25-35min后，特定光照肉眼可視觀察檢測。
8.根據權利要求6所述的RNase污染檢測方法，其特征在于，還包括構建標準曲線的步驟，將待檢測樣本的熒光信號值與標準曲線進行比對，得到待檢測樣本中RNase的含量；
所述標準曲線包括RNase標準品的濃度與RNase標準品熒光信號值的關系。
9.根據權利要求6-8任一項所述的RNase污染檢測方法，其特征在于，RNase作用底物的工作濃度為0.1-5μmol/L；
優選地，所述RNase污染檢測方法還包括負對照的熒光信號值檢測，負對照為無酶水；
優選地，檢測標準為待檢測樣品的熒光信號值比負對照的熒光信號值高2倍以上判定為待檢測樣品中含有RNase污染。
10.權利要求6-9任一項所述的RNase污染檢測方法在比較多個待檢測樣本中RNase含量或相對含量的應用。
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