[發明專利]一種利用黃曲霉素制備熒光量子點免疫層析檢測卡的方法

在審

• 申請號: 201911146742.4
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN112824877A
• 公開（公告）日: 2021-05-21
• 發明（設計）人: 詹愛軍;單君憶;招沐;閆文龍
• 申請（專利權）人: 揚州千代科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/533
• 代理公司: 揚州市蘇為知識產權代理事務所(普通合伙) 32283
• 代理人: 周全

1.一種利用黃曲霉素制備熒光量子點免疫層析檢測卡的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）材料選擇；

2）熒光量子點試劑配方；

3）黃曲霉毒素免疫抗原的合成；

4）黃曲霉毒素特異性抗體的制備；

5）單克隆抗體親和常數及效價檢測；

6）黃曲霉毒素檢測抗原合成；

7）熒光微球標記黃曲霉毒素b1抗體的制備；

8）AFB1抗體結合墊制備；

9）黃曲霉毒素b1熒光量子點檢測試劑條的制備；

10）完成。

2.根據權利要求1所述一種利用黃曲霉素制備熒光量子點免疫層析檢測卡的方法，其特征在于，步驟1）中的材料包括MES、NHS、碳二亞胺、2-（N-嗎啉代）乙磺酸、牛血清白蛋白、Tween-20, Tritonx-100、PVP-40；

HAT培養基、熒光微球、羊抗鼠二抗、硝酸纖維膜、玻璃纖維膜和吸水紙。

3.根據權利要求1所述一種利用黃曲霉素制備熒光量子點免疫層析檢測卡的方法，其特征在于，步驟2）包括：

硼砂緩沖液配置：硼酸6.183g，硼酸鈉6.864g；超純水定容至860mL；0.22μm膜濾過，置4℃備用；

0.1M、pH4.7MES緩沖液：19.52gMES，58.44g氯化鈉加超純水至1L，用氫氧化鈉調節PH值至4.7，置4℃儲存不超過一周；

10% BSA的配制：100.0g BSA；超純水定容至1000.0mL；0.22μm膜濾過，置4℃備用；

10% PVP-40的配制：100.0g PVP-40；超純水定容至1000.0mL；0.22μm膜濾過，置4℃備用；

10% Tween-20的配制：100.0mL Tween-20；超純水稀釋定容至1000.0mL；0.22μm膜濾過，置4℃備用；

10% 疊氮鈉的配制：100.0g 疊氮鈉；超純水定容至1000.0mL；0.22μm膜濾過，置4℃備用；

玻璃器皿清潔液：重鉻酸鉀1000g，濃硫酸2500mL，加蒸餾水至10000mL；

抗體標記物稀釋緩沖液的配制：取50g 蔗糖于250mL試劑瓶中，加入5mL10%BSA，3mL10%Tween-20，2mL10%PVP-40，0.2M PH7.4 PB定容至100mL，加入200uL10%疊氮鈉；

玻纖墊片處理液的配置：稱取海藻糖30.0g、BSA 5g、蔗糖15g于1000mL試劑瓶中，加入0.02mol/L PBS(pH7.4)100mL，5mL山羊血清，3.1mL Triton-100，加超純水定容至1L；

樣品墊處理液的配置：稱取海藻糖1.8g、BSA 6g、酪蛋白2.5g、BRIJ-35 5g、PVP-k405.4g、Na₂HPO₄ 13.578g_、NaH₂PO₄ 2.8g、NaCl 4.015g于1000mL試劑瓶中，加入5mL Tween-20，加超純水定容至1L；

抗原、二抗稀釋液的配置：稱取2g海藻糖于250mL試劑瓶中，加入1mL甲醇、5mL10%丙三醇，加0.02mol/L PBS定容至100mL；

0.2 mol/LPB：稱取 2.3gNa₂HPO₄和0.456g NaH₂PO₄，加超純水溶解后定容至1000mL，高壓滅菌20min后常溫保存，工作液pH值7.4；

0.02mol/L PBS稱取 17.4g NaCl，2.3gNa₂HPO₄和0.456g NaH₂PO₄，加超純水溶解后定容至1000mL，高壓滅菌20min后常溫保存，工作液pH值7.4；

5%二氯二鉀硅烷的氯仿溶液：將25mL 二氯二鉀硅烷溶解在 475mL 的氯仿溶液中，密封保存。