[發(fā)明專利]一株安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911146280.6
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110669736A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胥傳來;李月;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強(qiáng);吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 32104 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

一株安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測領(lǐng)域。本發(fā)明經(jīng)篩選得到一株安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No.18511。并將其用于食品中安乃近及其代謝物殘留物的檢測。此細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，對安乃近四種主要代謝物具有較好的親和力和檢測靈敏度，（MAA：IC₅₀=8.1 ng/mL，AA：IC₅₀=8.8 ng/mL，F(xiàn)A：IC₅₀=0.9 ng/mL，AAA：IC₅₀=0.6 ng/mL），可實(shí)現(xiàn)對肉制品、奶制品等中安乃近代謝物殘留量的檢測，為食品中安乃近代謝物殘留的免疫檢測提供了原料，具有實(shí)際應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

安乃近(dipyrone，簡寫為Dip)為臨床常用的解熱鎮(zhèn)痛藥之一，屬于吡唑酮類解熱鎮(zhèn)痛藥，自投入臨床用于治療以來已有百年的歷史。安乃近在體內(nèi)可迅速水解成活性產(chǎn)物4-甲氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine，MAA)，再進(jìn)入體循環(huán)；MAA在體內(nèi)代謝為4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine，F(xiàn)A)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine，AA)；AA可以繼續(xù)代謝為4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminoantipyrine，AAA)，具體機(jī)理如圖1所示。

安乃近具有較強(qiáng)的解熱和鎮(zhèn)痛作用，目前在許多國家被廣泛使用，但該藥能導(dǎo)致粒細(xì)胞減少、再生障礙性貧血、嚴(yán)重的過敏和休克虛脫等嚴(yán)重反應(yīng)。由于其毒副作用和尚不確切的藥效作用機(jī)理，世界上一些發(fā)達(dá)國家已經(jīng)對安乃近作出了停止或限制使用的規(guī)定，如美國、瑞典禁止該藥物用于食源性動物中，日本的肯定列表亦將其列入一律標(biāo)準(zhǔn)，而歐盟對安乃近在牛奶中的限量要求為 50 μg/kg(以MAA含量計算)。

目前報道的用于安乃近或其類似物的測定方法有分光光度法、流動注射化學(xué)發(fā)光光度法、薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)等，然而，這些儀器分析法都需要復(fù)雜的前處理，耗時，耗力，不適合大量樣品的快速檢測。為了維護(hù)廣大消費(fèi)者的利益，有必要建立一種針對安乃近的高效、快速的檢測方法，而酶聯(lián)免疫法（ELISA）前處理簡單，成本低，可實(shí)現(xiàn)大量樣品的快速檢測，且檢測時對樣本的純度要求不高。因此，建立高效的免疫學(xué)檢測方法很有必要，而建立此方法的一個重要前提即需篩選出針對安乃近的高特異性單克隆單體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD及其應(yīng)用，并在此基礎(chǔ)上建立ELISA方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案，一株安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，分類命名為單克隆細(xì)胞株，保藏日期2019年10月14日，保藏編號CGMCC No.18511。

安乃近單克隆抗體，它由所述保藏編號為CGMCC No.18511的安乃近單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CBD分泌產(chǎn)生。

安乃近單克隆抗體的應(yīng)用，用于食品中安乃近及其代謝物殘留物的檢測。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述應(yīng)用是用于牛奶中安乃近代謝物殘留物的分析檢測。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述應(yīng)用是制備ELISA競爭法檢測安乃近代謝物的試劑或檢測試劑盒。