[發明專利]一種篩選大花杓蘭內生真菌的培養基

有效

• 申請號: 201911143109.X
• 申請日: 2019-11-20
• 公開（公告）號: CN110684707B
• 公開（公告）日: 2023-02-10
• 發明（設計）人: 陳麗飛;胡良軍;李家琦;陳翠紅;孟緣;姜大崴
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/14
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明公開一種篩選大花杓蘭內生真菌的培養基，由以下組分制成：馬鈴薯、番石榴汁、葡萄糖、硫酸銨、硫酸鎂、海藻酸鉀、維生素、瓊脂、5?溴?4?氯?3?吲哚?α?D?半乳糖苷、玉米須浸出液、鏈霉素，其中培養基的pH為6.5?6.8。本發明提供的一種分離大花杓蘭菌根真菌的培養基，通過大量的試驗研究，對培養基配方的精心配制，旨在進一步提高對大花杓蘭菌根真菌分離純化的有效性；配方中還特別添加了5?溴?4?氯?3?吲哚?α?D?半乳糖苷和玉米須浸出液兩種核心成分，能夠具有促進大花杓蘭菌根真菌菌絲生長的作用。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種篩選大花杓蘭內生真菌的培養基。

背景技術

大花杓蘭植株高25-50cm，具粗短的根狀莖。莖直立，稍被短柔毛或變無毛，基部具數枚鞘，鞘上方具3-4枚葉。葉片橢圓形或橢圓狀卵形，長10-15cm，寬6-8cm，先端漸尖或近急尖，兩面脈上略被短柔毛或變無毛，邊緣有細緣毛。花序頂生，具1花，極罕2花；花序柄被短柔毛或變無毛；花苞片葉狀，通常橢圓形，較少橢圓狀披針形，長7-9cm，寬4-6cm，先端短漸尖，兩面脈上通常被微柔毛；花梗和子房長3-3.5cm，無毛；花大，紫色、紅色或粉紅色，通常有暗色脈紋，極罕白色。

大花杓蘭具有極好的觀賞性和藥用性，然而，自然條件下，大花杓蘭的繁殖率極低，而組培的大花杓蘭由于缺少與相應的菌根真菌共生，不僅移栽成活率低，生長發育緩慢，而且開花晚，甚至不開花，因此大花杓蘭菌根真菌的篩選具有極其重要的意義。

發明內容

本發明是通過以下技術方案實現的。

一種篩選大花杓蘭內生真菌的培養基，按重量份計由以下組分制成：馬鈴薯45-55、番石榴汁200-250、葡萄糖18-22、硫酸銨15-19、硫酸鎂0.2-0.4、海藻酸鉀0.15-0.19、維生素0.15-0.19、瓊脂20-25、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷0.01-0.02、玉米須浸出液35-40，其中還包括濃度為100μg/g的鏈霉素，培養基的pH為6.5-6.8。

所述玉米須浸出液制備方法包括：

將玉米須采用氫氧化鈉溶液在38℃下浸泡處理15min，然后進行過濾，洗滌至中性，再向玉米須中添加其質量10倍的清水，加熱至沸騰，保溫30min，然后再調節溫度至30℃，靜置24h，超聲波處理10min然后進行過濾，再將進行蒸汽滅菌15min，即得，所述超聲波頻率為40kHz，功率為500W，所述蒸汽滅菌采用121℃高壓蒸汽進行滅菌。

作為進一步的技術方案，所述番石榴汁制備方法為：

將番石榴進行去皮處理，然后添加到破壁機中，再添加番石榴5倍的清水，進行破壁處理20min，然后進行過濾，去除大顆粒濾渣，得濾液，對濾液進行滅菌處理，即得番石榴汁，所述滅菌采用132℃高壓蒸汽滅菌處理，其中，蒸汽壓力為205.8kPa。

作為進一步的技術方案，所述海藻酸鉀鉀與維生素混合重量份比為1:1。

作為進一步的技術方案，所述維生素為維生素B1。

大花杓蘭菌根真菌菌株的篩選培養方法為：

將大花杓蘭菌根真菌菌株接種到在盛有培養基的容器中培養3～7天，培養溫度為25℃，即可。

由以上的技術方案可知，本發明的有益效果是：