[發(fā)明專利]包括637AG突變的CYP2C9基因片段、所編碼的蛋白質(zhì)片段及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911136502.6
• 申請日: 2019-11-19
• 公開（公告）號: CN111004811B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡劍平;周曉陽;左明章;趙思文
• 申請（專利權(quán)）人: 北京醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京信諾創(chuàng)成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11728
• 代理人: 陳悅軍

本發(fā)明屬于生物學(xué)領(lǐng)域，涉及單堿基突變。更具體地，本發(fā)明涉及CYP2C9基因?qū)?yīng)于SEQ ID NO.2的第637位的突變位點，所述位點由野生型的A突變?yōu)镚，包含該突變位點的核酸片段、其編碼的蛋白質(zhì)片段及其應(yīng)用。本發(fā)明還提供了檢測所述突變位點的等位基因特異性寡核苷酸、試劑盒和檢測方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物學(xué)領(lǐng)域，涉及單堿基突變。更具體地，本發(fā)明涉及CYP2C9 基因單堿基突變。

背景技術(shù)

CYP2C9是細(xì)胞色素P450酶大家族CYP2C亞家族中最重要的一員，約占人肝微粒體CYP酶總量的20％。有大約10～16％臨床常用藥物經(jīng)由CYP2C9 氧化代謝，其中主要包括甲苯磺丁脲、S-華法林、苯妥英、格列吡嗪、格列苯脲、托拉噻咪、氯沙坦、厄貝沙坦和許多非甾體類抗炎藥物(如:布洛芬、氯諾昔康、雙氯芬酸和萘普生)等藥物(參見參考文獻(xiàn)1-5)。

CYP2C9基因具有高度多態(tài)性。根據(jù)目前的臨床研究顯示，CYP2C9基因的這種多態(tài)性是造成CYP2C9酶活性在個體之間極大不同的主要原因，因此在攜帶不同CYP2C9基因型的個體間可引起藥物療效的極大差異，甚至產(chǎn)生嚴(yán)重的藥物毒副作用或治療不充分。因此，研究CYP2C9基因多態(tài)性對藥物療效的影響將對臨床合理用藥提供重要的科學(xué)依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供CYP2C9基因的新的單堿基突變位點，包含該突變位點的核酸片段、其編碼的蛋白質(zhì)片段及鑒定該突變位點在用藥指導(dǎo)中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個方面是提供核酸片段，所述核酸片段包含對應(yīng)于SEQ ID NO.1的第1001位的突變位點，且是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列中的至少10個連續(xù)核苷酸，其中第1001位的核苷酸是G；或者所述核酸片段包含對應(yīng)于SEQ ID NO.2的第637位的突變位點，且是SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個連續(xù)核苷酸，其中第637位的核苷酸是G；或者為上述核酸片段的互補(bǔ)序列片段。

本發(fā)明的第二個方面，提供用于檢測和/或分析單堿基突變的引物，所述單堿基突變對應(yīng)于SEQ ID NO.1的第1001位或?qū)?yīng)于SEQ ID NO.2的第637 位，所述引物能夠擴(kuò)增所述單堿基突變。

本發(fā)明的第三個方面是提供用于檢測和/或分析單堿基突變的試劑盒，所述試劑盒包括本發(fā)明的引物。

本發(fā)明的第四個方面是提供本發(fā)明的核酸片段在制備用作檢測CYP2CP 基因突變的檢驗標(biāo)志物或制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第五個方面是提供分析核酸的方法，包括分析待測樣品中的包含對應(yīng)于SEQ ID NO.1的序列的核酸中對應(yīng)于第1001位的核苷酸或分析待測樣品中的包含對應(yīng)于SEQ ID NO.2的序列的核酸中對應(yīng)于第637位的核苷酸。

本發(fā)明的第六個方面是提供CYP2C9蛋白或其片段或變異體，所述蛋白序列為SEQID NO.3所示的序列；所述片段或變異體包含對應(yīng)于SEQ ID NO.3 的第213位的纈氨酸，并且為SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的至少10個連續(xù)氨基酸。

本發(fā)明提供了包含新的單堿基突變的CYP2C9基因和編碼序列。該基因在對應(yīng)于SEQ ID NO.2的第637位核苷酸由A突變?yōu)镚(637AG)，從而引起其編碼的氨基酸由異亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸，即對應(yīng)于SEQ ID NO.3的第213 位的纈氨酸。該突變的CYP2C9蛋白(命名為I213V)對藥物的代謝活性比野生型升高。該單堿基突變對攜帶此突變位點的個體的用藥具有指導(dǎo)意義。

附圖說明

圖1是實施例1中的對應(yīng)于本發(fā)明的SEQ ID NO.1序列的第1001位核苷酸測序圖譜；

圖2是昆蟲表達(dá)載體pFastBac-dual結(jié)構(gòu)圖；

圖3是實施例2中的各微粒體表達(dá)蛋白的Western結(jié)果圖；