[發(fā)明專利]基于雙金屬M(fèi)OF納米類氧化酶的磷酸根比色檢測(cè)法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911133603.8
• 申請(qǐng)日: 2019-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN110987843B
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李欣;牛湘衡;劉朋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/33
• 分類號(hào): G01N21/33;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于Treated-UiO-66-Ce/Zr納米類氧化酶的磷酸根比色檢測(cè)法，其特征在于，步驟如下：

1）分別于5mL離心管中加入不同濃度的磷酸根和0.267mL 1 mg/mL Treated-UiO-66-Ce/Zr 納米類氧化酶，反應(yīng)1～30min；

2）再向混合液中依次加入0.1 mL 5 mM的TMB和0.2 M的pH為4的醋酸鹽緩沖液，確定溶液最終總體積為3mL，混勻體系后，反應(yīng)1～30 min；所述磷酸根在體系內(nèi)的最終濃度為0.67μM、1.33 μM、2 μM、2.67 μM、3.33 μM、6.67 μM、13.33 μM、20 μM、26.67 μM、33.33 μM、66.67 μM、133.33 μM、200 μM、266.67 μM、333.33 μM、400 μM、466.67 μM、533.33 μM、600μM或666.67 μM；

3）用紫外-可見吸收分光光度計(jì)測(cè)定混合溶液紫外吸收光譜，記錄波長(zhǎng)為652nm處的吸光度并繪制以TMB為顯色劑的磷酸根濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

以ABTS為顯色底物，替代步驟2）中的TMB，并重復(fù)步驟1）～2），用紫外-可見吸收分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，記錄波長(zhǎng)為408nm處的吸光度并繪制以ABTS為顯色劑的磷酸根濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

4）將測(cè)量值按照公式A’=A_TMB/A_ABTS進(jìn)行計(jì)算，所得的A’與對(duì)應(yīng)的磷酸根濃度繪制校準(zhǔn)后的磷酸根濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

5）將待測(cè)磷酸根樣品按照上述方法用紫外-可見吸收分光光度計(jì)分別測(cè)定以TMB和ABTS為底物時(shí)的吸光度，通過公式A’=A_TMB/A_ABTS計(jì)算出待測(cè)磷酸根樣品的A_TMB/A_ABTS的值，再將該值與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線比對(duì)，即可獲得磷酸根濃度；

其中，步驟1）中所述Treated-UiO-66-Ce/Zr納米類氧化酶，其制備方法包括如下步驟：

A）將合成所需的鋯鹽與鈰鹽均勻混合，然后，依次加入對(duì)苯二甲酸、一定體積的調(diào)節(jié)劑，以DMF為溶劑溶解，充分混勻；其中，對(duì)苯二甲酸的摩爾量等于鋯鹽和鈰鹽的摩爾量之和，鋯鹽:鈰鹽的摩爾比為1mmol:0.1～10mmol；所述調(diào)節(jié)劑為乙酸、甲酸或苯甲酸、所述調(diào)節(jié)劑的體積為1～8mL；DMF的體積為10～50mL；

B）將混合溶液置于水熱反應(yīng)器中，在80～150℃溫度下反應(yīng)2～48h，取出產(chǎn)物，用丙酮、乙醇分別淋洗干凈，離心干燥，制得雙金屬有機(jī)框架UiO-66-Ce/Zr；

C）配制NaOH和H₂O₂預(yù)備液，混合均勻備用；其中，NaOH和H₂O₂的體積比為10:1～25:1，NaOH的濃度為2.5M，H₂O₂的濃度為30 wt%；

D）稱取20 mg步驟B）得到的UiO-66-Ce/Zr于4.0 mL去離子水中，超聲20min使其分散均勻，加入50μL步驟C）中新鮮配制的預(yù)備液，氧化5～60min，得復(fù)合物；

E）用去離子水將復(fù)合物反復(fù)淋洗直至pH呈中性，60℃烘干，收集即可得到Treated-UiO-66-Ce/Zr納米類氧化酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于Treated-UiO-66-Ce/Zr納米類氧化酶的磷酸根比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟1）中，分別于5mL離心管中加入不同濃度的磷酸根和0.267mL 1 mg/mLTreated-UiO-66-Ce/Zr，反應(yīng)5min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于Treated-UiO-66-Ce/Zr納米類氧化酶的磷酸根比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟2）中，混勻體系后，反應(yīng)5min。