[發(fā)明專利]一種硒蛋白中硒代氨基酸的測定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911133352.3
• 申請日: 2019-11-19
• 公開（公告）號: CN110780006A
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳永波;劉淑琴;張朝陽;胡百順;李衛(wèi)東;黃光昱;陳娥;秦邦;瞿勇
• 申請（專利權(quán)）人: 恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院(恩施土家族苗族自治州硒應(yīng)用技術(shù)與產(chǎn)品開發(fā)研究院)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 11569 北京高沃律師事務(wù)所
• 代理人: 呂紀(jì)濤

本發(fā)明提供了一種硒蛋白中硒代氨基酸的測定方法，涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的測定方法包括以下步驟：(1)將硒蛋白樣品與鹽酸混合，進(jìn)行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白樣品的質(zhì)量為10～30mg；所述水解的溫度為140～170℃，時間為10～40min；(2)調(diào)節(jié)所述水解液的pH值至6～8，得到前處理液；(3)采用高效液相色譜?氫化物發(fā)生?原子熒光光譜法對所述前處理液進(jìn)行測定，得到硒代氨基酸的含量。本發(fā)明提供的測定方法采用微波水解硒蛋白，然后通過高效液相色譜?氫化物發(fā)生?原子熒光光譜法測定硒代氨基酸，測定方法操作簡便，節(jié)省時間和成本，能夠快速、準(zhǔn)確地對各類含硒蛋白中的硒代氨基酸進(jìn)行測定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種硒蛋白中硒代氨基酸的測定方法。

背景技術(shù)

硒蛋白是生物有機(jī)硒的主要存在形式之一，廣泛存在于富硒產(chǎn)品原料(硒酵母、硒蛋白粉等)、保健品(富硒蛋白片、膠囊等)及富硒產(chǎn)品中，硒蛋白中硒代氨基酸的檢測方法一直是科研工作者研發(fā)的熱點(diǎn)，其儀器分析方法可用高效液相-電感耦合等離子質(zhì)譜(HPLC-ICP-MS)、高效液相-氫化物發(fā)生原子熒光光譜法(HPLC-HG-AFS)等，但樣品前處理方法仍然停留在從國外引進(jìn)的酶水解法上。酶水解的前處理方法操作復(fù)雜(需多次加酶、振蕩)、時間長(需30多個小時)、成本高(需要購買昂貴的對照品，一個樣品分析需幾千元)，水解不完全(肽鏈與硒代氨基酸并存，分子量在20000道爾頓左右)，不適宜廣泛采用。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明目的在于提供一種硒蛋白中硒代氨基酸的測定方法。本發(fā)明提供的測定方法采用微波水解硒蛋白，然后通過高效液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定硒代氨基酸，操作簡便，節(jié)省時間和成本，且測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種硒蛋白中硒代氨基酸的測定方法，包括以下步驟：

(1)將硒蛋白樣品與鹽酸混合，進(jìn)行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白樣品的質(zhì)量為10～30mg；所述水解的溫度為140～170℃，時間為10～40min；

(2)調(diào)節(jié)所述水解液的pH值至6～8，得到前處理液；

(3)采用高效液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法對所述前處理液進(jìn)行測定，得到硒代氨基酸的含量。

優(yōu)選地，所述硒蛋白樣品的質(zhì)量為15～25mg。

優(yōu)選地，所述硒蛋白樣品的質(zhì)量為20mg。

優(yōu)選地，所述微波水解的溫度為150～160℃。

優(yōu)選地，所述微波水解的時間為30～40min。

優(yōu)選地，所述前處理液的pH值為7～8。

優(yōu)選地，所述高效液相色譜采用的色譜柱為陰離子交換柱。

優(yōu)選地，所述測定的周期在6min以內(nèi)。

本發(fā)明提供了一種硒蛋白中硒代氨基酸的測定方法，包括以下步驟：(1)將硒蛋白樣品與鹽酸混合，進(jìn)行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白樣品的質(zhì)量為10～30mg；所述水解的溫度為140～170℃，時間為10～40min；(2)調(diào)節(jié)所述水解液的pH值至6～8，得到前處理液；(3)采用高效液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法對所述前處理液進(jìn)行測定，得到硒代氨基酸的含量。本發(fā)明提供的測定方法采用微波水解硒蛋白，然后通過高效液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法(HPLC-HG-AFS)測定硒代氨基酸：硒蛋白經(jīng)微波水解，分解成硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒甲基-L-硒代半胱氨酸等游離態(tài)含硒小分子物質(zhì)，即硒代氨基酸；水解液調(diào)節(jié)pH后通過高效液相色譜將其中硒代氨基酸成分分離出來，分離出來的硒代氨基酸成分進(jìn)入氫化物發(fā)生裝置，被轉(zhuǎn)換成硒化氫(H₂Se)；再由載氣(氬氣)將氫化物帶入原子熒光光譜儀中進(jìn)行測定。