[發明專利]25-羥基維生素D3

在審

• 申請號: 201911131411.3
• 申請日: 2019-11-19
• 公開（公告）號: CN111057661A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 徐志南;朱勇剛;周斌;湯丹丹;劉偉;黃磊
• 申請（專利權）人: 浙江圣達生物藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12P7/02;C12R1/085
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

1.25-羥基維生素D₃生產菌株，其特征在于：其分類名為蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)，保藏編號為：CCTCC M 2019385。

2.權利要求1所述的25-羥基維生素D₃生產菌株的篩選方法，其特征在于：從化工廠附近深土層取土樣，加入無菌水中制備菌懸液，吸取菌懸液接種于富集培養基，培養后稀釋涂布于分離培養基平板，挑取不同形態的代表性單菌落至種子培養基培養，再轉接至轉化培養基中進行轉化實驗，萃取轉化液用于高效液相色譜檢測25-羥基維生素D₃的濃度，從而篩選得到所述25-羥基維生素D₃生產菌株。

3.根據權利要求2所述的篩選方法，其特征在于：

所述富集培養基組分為：0.5g/L酵母粉，5g/L磷酸氫二銨，1g/L磷酸氫二鉀，1g/L磷酸二氫鈉，0.25g/L無水硫酸鎂，20g/L瓊脂粉；

分離培養基組分為：0.5g/L維生素D3，5g/L磷酸氫二銨，1g/L磷酸氫二鉀，1g/L磷酸二氫鈉，0.25g/L無水硫酸鎂，20g/L瓊脂粉。

4.根據權利要求2所述的篩選方法，其特征在于：

所述種子培養基組分為：5g/L葡萄糖，0.5g/L酵母粉，5g/L磷酸氫二銨，1g/L磷酸氫二鉀，1g/L磷酸二氫鈉，0.25g/L無水硫酸鎂；

轉化培養基組分為：5g/L葡萄糖，3g/L酵母粉，5g/L磷酸氫二銨，1g/L磷酸氫二鉀，1g/L磷酸二氫鈉，0.25g/L無水硫酸鎂，β-環糊精10g/L。

5.權利要求1所述25-羥基維生素D₃生產菌株的應用，其特征在于，所述25-羥基維生素D3菌株用于以維生素D3為底物合成25-羥基維生素D₃。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，在25-羥基維生素D₃生產菌株合成25-羥基維生素D₃過程中，所述底物維生素D₃溶解于丙二醇或者丙二醇和乙醇的混合溶劑中，其中，丙二醇與乙醇的體積比為10：0～5：5。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，維生素D₃添加時間為穩定期前期，維生素D₃添加濃度為2g/L，培養溫度為37℃，pH為7.2。