[發明專利]一種分泌抗大黃魚免疫球蛋白T單克隆抗體的雜交瘤細胞株

有效

• 申請號: 201911130192.7
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號: CN110713540B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 陳新華;傅秋玲;母尹楠
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N5/20;G01N33/569
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明公開了一種分泌抗大黃魚IgT單克隆抗體的雜交瘤細胞株IgT?6，保藏號為：CCTCC NO:C2019215。本發明以純化的重組大黃魚IgT重鏈胞外區蛋白抗原四次免疫BALB/C小鼠后；將針對大黃魚IgT抗體效價最高的小鼠取脾細胞，與SP2/0骨髓細胞進行融合，篩選獲得抗大黃魚IgT單克隆抗體的雜交瘤細胞株IgT?6。用本發明方法制備獲得的單克隆抗體IgT?6具有特異性強、效價高、穩定性好等特點，可用于大黃魚疾病的診斷和疫苗使用效果的評價，對大黃魚疾病的研究及防治具有重要理論和現實意義。

技術領域

本發明屬于單克隆抗體制備的技術領域，具體涉及一種分泌抗大黃魚(Larimichthys crocea) IgT單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

背景技術

大黃魚 (Larimichthys crocea) 是我國特有經濟魚種，也是目前我國海水養殖魚類產量最高的魚種，2017年產量超過17萬噸（2018中國漁業統計年鑒），被農業部列為八大最具優勢的出口水產品之一。隨著我國海水養殖業的快速發展，養殖規模不斷擴大及養殖環境日益惡化，養殖病害防治問題日益突出，成為水產科研工作者的研究重點。從魚類自身的免疫能力出發來研究其抵御疫病侵襲的機理，不僅有助于認識脊椎動物免疫系統的進化規律及特點，而且有助于促進魚類疫苗的研制和發展。魚類是最早出現免疫球蛋白的脊椎動物，雖然與哺乳動物的免疫系統相比還較原始，但是已經形成包括非特異性免疫反應、抗原特異性的細胞免疫和體液免疫等比較完善的免疫應答系統。

免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig) 是魚類特異性免疫中關鍵的分子。IgT則是硬骨魚類中新近發現的一類免疫球蛋白分子，具有與哺乳動物IgA類似的結構和功能；IgT在腸、皮膚、鰓和鼻黏液中以二聚體形式存在，并通過腸、皮膚或鰓上皮細胞表達的多聚免疫球蛋白受體轉運至黏液中，其主要參與魚類局部黏膜免疫應答（Zhang Y A, Salinas I,and Sunyer J O. Recent findings on the structure and function of teleost IgT[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2011, 31: 627-634.）。借助抗大黃魚IgT單克隆抗體，可進行大黃魚IgT+ B淋巴細胞分選，將為大黃魚B淋巴細胞的功能及相關免疫學機制研究奠定基礎。此外，魚類感染病原或接種疫苗后，魚類黏液中產生針對該抗原的特異性抗體，也可以通過該單克隆抗體進行特異性抗體效價檢測（ZHANG Y A, SALINAS I, LI J,et al. IgT, a primitive immunoglobulin class specialized in mucosal immunity[J]. Nature Immunology, 2010, 11(9): 827）。因此，利用抗大黃魚IgT單克隆抗體，通過檢測大黃魚黏液中該特異性IgT的效價，可進行大黃魚疾病的診斷和疫苗使用效果的評價，對大黃魚疾病的研究及防治具有重要理論和現實意義。然而，目前尚未見報道大黃魚IgT單克隆抗體的研制。

發明內容

本發明的目的在于為了解決利用單克隆抗體研究大黃魚免疫球蛋白結構與功能，將單克隆抗體用于大黃魚病原微生物檢測，協助魚病診斷與防治等，提供抗大黃魚IgT單克隆抗體及其制備方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種抗大黃魚免疫球蛋白T（IgT）的單克隆抗體雜交瘤細胞株IgT-6，所述雜交瘤細胞株IgT-6已于2019年9月18日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:C2019215，中國典型培養物保藏中心的地址為中國，武漢，武漢大學。

所述雜交瘤細胞株IgT-6和抗大黃魚IgT單克隆的制備方法按以下步驟實現：

1）制備免疫原-重組大黃魚IgT蛋白；