[發明專利]大株紅景天注射液中對羥基苯乙酸的含量測定方法

有效

• 申請號: 201911124508.1
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號: CN110716000B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 李緒文;任素娟;金永日
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 龍濤

本發明公開了一種大株紅景天注射液中對羥基苯乙酸的含量測定方法，屬于中藥化學研究領域。本發明以大株紅景天注射液為原料，經硅膠柱層析、制備液相分離純化并利用C¹³?NMR等波譜學手段證明了其中對羥基苯乙酸的存在，并在此基礎上建立了測定其含量的HPLC測定方法。

技術領域

本發明涉及中藥化學領域，具體涉及一種大株紅景天注射液中對羥基苯乙酸的含量測定方法。

背景技術

大株紅景天Rhodiola wallichiana(HK.)S.H.Fu var.cholaensis(Praeger)S.H.Fu為景天科紅景天屬多年生草本植物，又名大株粗莖紅景天，2000多年前的《神農本草經》、唐代的《千金翼方》和明代的《本草綱目》均有記載，主產于西藏、四川及云南等地?，F代研究表明，大株紅景天主要化學成分有糖苷類、香豆素類、黃酮類、揮發油、生物堿、甾體、酚類化合物以及有機酸(沒食子酸、草酸、檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸)和微量無機元素等，具有明顯的抗腫瘤、抗衰老、抗缺氧、抗輻射、抗疲勞以及調節神經系統等作用，被廣泛用于醫療、保健品、化妝品等領域。

大株大株紅景天注射液(國藥準字Z20060361)是由景天科植物大株紅景天Rhodiola Kirilowii(Regel)Regel.的干燥根及根莖經水提醇沉工藝制成，為淡黃色至棕黃色的澄明液體，具有活血化瘀、通脈止痛之功效，主治冠心病、心絞痛。

目前國內外對大株紅景天化學成分研究報道較少，主要集中在酪醇及其苷類、黃酮苷類、酚酸類、苯丙素類以及萜類等化合物，含量測定方面的研究多集中于紅景天苷、酪醇和沒食子酸等。關于大株紅景天注射液的研究多集中于藥理作用和臨床應用，尚未發現從大株紅景天注射液中發現對羥基苯乙酸以及其含量測定的文獻報道。

發明內容

本發明從大株紅景天注射液中分離純化得到對羥基苯乙酸，在此基礎上建立了其含量測定方法。

為實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

首先取40支大株紅景天注射液凍干，固形物以二氯甲烷-甲醇-水＝7:1.2:0.2和二氯甲烷-甲醇-水＝5:3:0.8為流動相進行硅膠柱層析(展開劑：氯仿-甲醇-水＝7:1:0.1、9:3:0.2和5:3:0.7)，得到含對羥基苯乙酸的樣品粉末2.3g。將此樣品用流動相溶解，利用制備型高效液相色譜儀(流動相為乙腈-水＝95:5)進行純化，收集含對羥基苯乙酸的流分，回收溶劑后凍干，得到對羥基苯乙酸42.8mg。將其核磁數據與文獻報道的對羥基苯乙酸核磁數據對比，確定其為對羥基苯乙酸，經高效液相色譜儀檢測，其純度為98.96％。核磁數據如下：核磁數據：¹³C NMR(CD₃OD，150MHz)δ_C：127.68(C-1)，131.59(C-2,6)，116.45(C-3,5)，157.59(C-4)，177.46(-COOH)。^1H NMR(CD₃OD，600MHz)δ_H：7.18(d,J＝8.4Hz,2H)，6.81(d,J＝8.5Hz,2H)，3.56(s,2H)。

在此基礎上建立的大株紅景天注射液中對羥基苯乙酸的HPLC含量測定方法如下。

色譜條件：

流動相為乙腈(A)-0.05％磷酸溶液(B)；梯度洗脫程序為0～200min，溶液A：5％～7％，溶液B：95％～93％；柱溫為30℃；流速為1.0mL·min^-1；檢測波長為276nm；進樣體積為20μL。

供試品溶液的制備：

取1支大株紅景天注射液凍干，固形物用甲醇或乙腈或它們與水的混合溶液溶解并定容到指定體積，搖勻，過濾，制成供試品溶液。

對照品溶液的制備：