[發明專利]一種具有中央灌流系統的活體神經支架及其制造方法

有效

• 申請號: 201911124490.5
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號: CN110960732B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 石青;魏子厚;孫韜;陳勰;下田真吾;黃強;福田敏男
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/50;C12N5/071;C12M3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于制造活體神經支架的模具，所述活體神經支架包括三維培養制作而成的神經細胞束，所述神經細胞束為具有灌流通道的管腔結構，并且所述灌流通道內修飾有內皮細胞層，其特征在于，所述模具包括：第一定位板、下安裝板、上安裝板和針；

所述第一定位板有兩個，其分別設置有一定數量個用于安裝所述針的第一孔；

所述下安裝板和所述上安裝板能夠裝配在一起，形成一定數量個管腔，并且在所述管腔的兩端形成能夠與所述第一定位板配合的表面；由此，使得所述下安裝板和所述上安裝板放置于兩個所述第一定位板之間時，所述第一孔與所述管腔的軸線對齊；

所述上安裝板和所述下安裝板與兩端的所述第一定位板可拆卸地連接；

所述模具還包括第二定位板和毛細玻璃管；

所述第二定位板有兩個，其上分別設置有一定數量個用于安裝所述毛細玻璃管的第二孔；

所述下安裝板和所述上安裝板放置于兩個所述第二定位板之間時，所述第二孔與所述管腔的軸線對齊；

所述毛細玻璃管能夠在所述管腔內滑動。

2.根據權利要求1所述的模具，其特征在于，所述下安裝板具有平行于所述管腔的第一表面，并且在所述第一表面上設置有一定數量個第一溝槽；所述上安裝板具有平行于所述管腔的第二表面，并且在所述第二表面上設置有一定數量個第二溝槽；所述下安裝板嵌入所述上安裝板時，所述第一表面能夠與所述第二表面接觸，從而使所述第一溝槽和所述第二溝槽形成所述管腔。

3.一種使用根據權利要求1或2所述的模具制備活體神經支架的方法，包括如下步驟：

步驟1，使用第一定位板、下安裝板、上安裝板和針制作第一裝配體，在所述第一裝配體中制作用于為神經干細胞線提供三維線性化生長環境的瓊脂糖導管；

步驟2，移除所述第一裝配體中的第一定位板和針，裝配第二定位板和毛細玻璃管得到第二裝配體，在所述瓊脂糖導管的管腔內對神經干細胞三維培養，制作包裹神經干細胞的水凝膠，所述包裹神經干細胞的水凝膠為具有內部通道的管腔結構；

步驟3，在所述內部通道的內壁上修飾一層內皮細胞層；

步驟4，將營養液通入所述包裹神經干細胞的水凝膠，在長期灌流培養的條件下，培養至神經干細胞線性生長為束狀結構的神經束；

步驟5，將所述神經束從所述瓊脂糖導管中剝離，得到活體神經支架。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟1進一步包括：

稱取瓊脂糖粉末，溶解于去離子水中，得到瓊脂糖溶液；

在燒杯內加入磁力攪拌子，加熱至瓊脂糖溶液沸騰；

將沸騰的瓊脂糖溶液靜置待氣泡消失后，倒入模具中，靜置直到瓊脂糖溶液冷卻至室溫，得到結構穩定的瓊脂糖導管。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟2進一步包括：

配置GelMA水凝膠原液；

進行神經干細胞的培養及傳代；

將傳代后的神經干細胞做離心處理，去掉培養液，并向離心后的神經干細胞中加入經由微孔過濾膜過濾之后的GelMA水凝膠原液，吹散神經干細胞，使所述神經干細胞均勻分布在GelMA原液中；

取包裹有神經干細胞的GelMA原液，緩慢加入所述瓊脂糖導管的管腔中；

從所述第二定位板的第二孔插入毛細玻璃管，利用光交聯法，使用紫外燈照射瓊脂糖導管得到包裹有神經干細胞的水凝膠。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟3進一步包括：

取下第二定位板，打開下安裝板和上安裝板，取出填充有所述包裹有神經干細胞的水凝膠的瓊脂糖導管；

抽出所述毛細玻璃管一定長度，將嵌有所述毛細玻璃管的瓊脂糖導管置于培養皿中；

將內皮細胞懸浮液注射進所述毛細玻璃管內，使內皮細胞在所述包裹有神經干細胞的水凝膠的內部通道表面貼壁生長；

待內皮細胞生長，得到貼壁生長的內皮細胞層。