[發(fā)明專利]一種衍生化反應輔助富集家蠶或其制品中活性成分的檢測方法

在審

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• 申請日: 2019-11-15
• 公開（公告）號: CN111879883A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設計）人: 戚歡陽;許光輝;黃亦琦
• 申請（專利權）人: 廈門市健康醫(yī)療大數據中心（廈門市醫(yī)藥研究所）
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/08
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

本發(fā)明公開了一種衍生化反應輔助富集家蠶或其制品中活性成分的檢測方法，將干燥后的待測物加入過量的衍生化試劑進行衍生化反應，可以去除生物樣品中各種復雜結構的代謝物中極性基團對目標分析物的干擾，完成家蠶或其制品中藥效相關的活性物質溴西泮的輔助富集，在增加了活性成分在分析檢測樣品中濃度的同時，節(jié)省了樣品制備時間。

技術領域

本發(fā)明屬于生物活性物質檢測技術領域，具體涉及一種衍生化反應輔助富集家蠶或其制品中活性成分的檢測方法。

背景技術

《本草綱目》記載蠶為“神蟲”，家蠶終生以桑葉為食，具有益肝腎、補陽、抗疲勞和抗衰老之藥效?，F代藥理實驗證實，家蠶具有降血糖、降血脂，抗疲勞，增強機體免疫力和抗腫瘤等作用。家蠶制品之一為蠶幼蟲感染白僵菌而僵死的干燥全蟲即白僵蠶，白僵蠶具有祛風解痙，化痰散結。用于治療治中風失音，驚癇，頭風，喉風。喉痹，瘰疬結核。現代藥理研究證實，抗驚厥作用和催眠作用。目前針對家蠶及其制品中針對鎮(zhèn)靜催眠活性的活性成分的檢測仍然沒有較為可靠有效的方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種衍生化反應輔助富集家蠶或其制品中活性成分的檢測方法。

本發(fā)明的技術方案如下：

一種衍生化反應輔助富集家蠶或其制品中活性成分的檢測方法，該活性成分為溴西泮，具體包括如下步驟：

(1)將干燥后的家蠶或其制品浸泡于低級醇水溶液或無水低級醇中，浸泡15-45min，然后進行超聲提取或加熱提取15-30min，接著離心獲得第一上清液，將該第一上清液干燥后獲得待測物；

(2)將待測物與1-10倍體積的衍生化試劑混合于65-75℃進行衍生化反應30-45min，以除去待測物中各種代謝物中的極性基團對溴西泮的干擾，完成溴西泮的輔助富集，衍生化反應完成后所得的反應液經離心后，獲得第二上清液；

(3)對上述第二上清液采用氣相色譜質譜聯用法進行檢測。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述低級醇水溶液的濃度至少為10％。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述低級醇為甲醇或乙醇。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述衍生化試劑為硅烷化試劑。

進一步優(yōu)選的，所述硅烷化試劑為BSTFA或MSTFA。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述超聲提取的功率為200-240W，頻率為75-85Hz。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述加熱提取的溫度為60-90℃。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明過程簡單、高效，干燥后的待測物加入過量的衍生化試劑進行衍生化反應，可以去除生物樣品中各種復雜結構的代謝物中極性基團對目標分析物的干擾，完成家蠶或其制品中藥效相關的溴西泮的輔助富集，增加了活性成分在分析檢測樣品的中的濃度，同時節(jié)省了樣品制備時間，反應液經離心后，取上清液直接進樣分析。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1的實驗結果圖之一。

圖2為本發(fā)明實施例1的實驗結果圖之二。

圖3為本發(fā)明實施例2的實驗結果圖之一。

圖4為本發(fā)明實施例2的實驗結果圖之二。

具體實施方式

以下通過具體實施方式對本發(fā)明的技術方案進行進一步的說明和描述。

實施例1

儀器與試藥：實驗儀器見表1；試劑：無水乙醇(20161210)(西隴科學股份有限公司)；水為自制超純水；硅烷化試劑為BSTFA(批號：25561-30-2，色譜純)。