[發明專利]一種防治核桃炭疽病的生防菌株JK17及其篩選方法、應用

有效

• 申請號: 201911116104.8
• 申請日: 2019-11-15
• 公開（公告）號: CN110669702B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 徐麗;劉慶忠;陳新;宗曉娟;魏海蓉;張力思;洪坡;朱東姿;譚鉞;王甲威
• 申請（專利權）人: 山東省果樹研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A01N63/27;A01P3/00;C12R1/39
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 陳娟

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種防治核桃炭疽病的生防菌株JK17及其篩選方法、應用。該生防菌株JK17的保藏編號為：CGMCC No.18726。本發明通過從無病蟲害的核桃葉片中分離純化得到的生防菌株?假單胞菌屬中的熒光假單胞菌，能夠防治核桃炭疽病，防治效果能夠達到84%以上，抑菌效果好；本發明提供的生防菌株，能夠減少農藥使用，安全無毒，實現對核桃保護和治療的雙重目的。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種防治核桃炭疽病的生防菌株JK17及其篩選方法、應用。

背景技術

核桃（Juglans regia L.），核桃屬胡桃科，在我國栽培歷史悠久，被廣泛種植，是我國重要的“木本糧油”戰略樹種。因為核桃具有很高的經濟、生態和社會效益，在國內、國際市場上的需求量不斷增加。隨著核桃栽培面積的不斷擴大，病害也日趨嚴重。炭疽病是危害核桃生產的主要病害之一，山東省泰安、濟南、濟寧等核桃主產區炭疽病的發病率高達90%、病果率30%以上。炭疽病主要危害核桃的果實，也危害葉片、芽和嫩梢部位，感病后易導致早期落果、爛果或果仁干癟等，嚴重影響產量和品質。目前普遍認為造成核桃炭疽病的病原有兩種，膠胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides (Penz.)Penz．＆Sacc．和尖胞炭疽菌Colletotrichum acutatum J.H．Simmonds ex J．H．Simmonds］。

核桃炭疽病已成為制約核桃產業發展的主要因素。為了防治炭疽病，生產上主要以使用化學殺菌劑為主，因此每年需要花費大量農藥、資金和勞動力。由于殺菌劑在果園中長期使用，導致核桃炭疽病菌產生抗藥性，使炭疽病的防治難度加大。而且長期大量使用化學農藥勢必造成環境污染，嚴重危害人體健康。因此，尋求安全、無毒、有效控制核桃炭疽病的新方法成為當務之急。目前，學術界對于化學藥劑的替代品生防菌的研究報道逐年增加，利用生防菌對病害進行生物防治是必然趨勢。

發明內容

本發明的目的在于提供一株防治核桃炭疽病的生防菌株JK17。

本發明還提供了一種上述防治核桃炭疽病的生防菌株的篩選方法。

本發明的再一目的為提供了上述生防菌株在防治核桃炭疽病中的應用。

本發明為了實現上述目的所采用的技術方案為：

本發明提供了一株防治核桃炭疽病的生防菌株JK17，其保藏編號為：CGMCCNo.18726。

本發明還提供了一種上述防治核桃炭疽病的生防菌株JK17的篩選方法，，包括以下步驟：

（1）樣品采集及分離：從核桃園中采集無病蟲危害的核桃葉片，取0.5~1.0cm葉片用75%酒精消毒30s，再用1.0％NaClO處理10min，最后用無菌水沖洗三次；將經過表面消毒的葉片加5mL無菌水研磨，靜置10min；

（2）靜置后按照梯度濃度1×10²、1×10³和1×10⁴用無菌水依次進行稀釋，分別取100μL涂布在NA平板上，置于28℃恒溫培養箱中培養；待平板長出菌落后，根據菌落的形態特征，挑取單個菌落，經劃線、純化后得到細菌菌株JK17，4℃冰箱保存在NA斜面上。

本發明還提供了一種上述生防菌株JK17在防治核桃炭疽病中的應用。

進一步的，所述生防菌株在防治核桃炭疽病時，采用活化后的菌株或菌株發酵液。

上述菌株發酵液采用以下方法制備而成：將JK17菌株置于100 mL牛肉膏蛋白胨液體培養基（NB）中，28℃振蕩培養2d以上，JK17菌株菌液濃度達到10⁵～10⁶CFU/mL，發酵菌液8000rmp離心20min后取上清液，用0.22μ濾膜過濾獲得無菌濾液。