[發(fā)明專利]一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911113635.1
• 申請(qǐng)日: 2019-11-14
• 公開（公告）號(hào): CN110684719A
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐丹;張娟;涂穎;顏光前;起玨;崔婷婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N13/00
• 代理公司: 11390 北京和信華成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 張永輝

1.一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

S1：切取臨床手術(shù)中的人體正常皮膚組織，通過碘伏進(jìn)行消毒，消毒完成后，使用0.25％胰蛋白酶消化液消化皮膚組織，將組織分散成單個(gè)細(xì)胞，然后將細(xì)胞液放在適宜的培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基放置在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，讓這些原代細(xì)胞生長和增殖；

S2：原代細(xì)胞24小時(shí)左右后貼壁長滿培養(yǎng)基，然后再用0.25％胰蛋白酶消化液消化，換上新的培養(yǎng)基并接種到多個(gè)六孔板上，六孔板上的接種密度約為5X10⁴/ml，接種后的各個(gè)六孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)直至貼壁，再更換新的培養(yǎng)基，用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，將多個(gè)六孔板分為正常對(duì)照組，以及各個(gè)照射時(shí)間段的實(shí)驗(yàn)組；

S3：將六孔板放置在超凈臺(tái)上，超凈臺(tái)里面設(shè)置紫外燈，紫外燈先預(yù)熱15min，使光源發(fā)出的光強(qiáng)度穩(wěn)定，將已經(jīng)接種的六孔板置于紫外燈下，通過紫外燈對(duì)六孔板進(jìn)行照射，根據(jù)照射時(shí)間的不同得到不同的細(xì)胞損傷模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法，其特征在于：所述S1中的人體正常皮膚組織為包皮環(huán)切術(shù)中切出的正常皮膚組織或美容皮膚切除手術(shù)中切出的正常皮膚組織。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法，其特征在于：所述S1中培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞的生存環(huán)境設(shè)置為37攝氏度、5％CO₂和PH7.2-7.4。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法，其特征在于：所述S1和S2中培養(yǎng)基的配制方法設(shè)置為：超凈工作臺(tái)內(nèi)取一定量的MEM-α基礎(chǔ)培養(yǎng)基于無菌、干凈的瓶內(nèi)，加入50U/ml青霉素、100U/ml鏈霉素、血清、三蒸水、表皮生長因子，并通過鹽酸調(diào)節(jié)PH至7.2-7.4，通過磁力攪拌器攪拌均勻，0.22um過濾器過濾后轉(zhuǎn)移至新的瓶內(nèi)，4攝氏度冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法，其特征在于：所述S3中紫外燈發(fā)出的紫外線設(shè)置為UVA、UVB或UVC波段，且紫外燈距離六孔板的垂直距離為25cm，紫外燈的照射強(qiáng)度通過輻照計(jì)測得，紫外線波段、照射強(qiáng)度和照射時(shí)間均記錄在標(biāo)簽上，貼在得到的細(xì)胞損傷模型上。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫外線照射的細(xì)胞損傷模型制備方法，其特征在于：所述S1-S3期間不進(jìn)行自然采光，采用紅光照明。