[發明專利]一種提高本氏煙組培苗移栽成活率的方法

有效

• 申請號: 201911113311.8
• 申請日: 2019-11-14
• 公開（公告）號: CN110679457B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 李紀元;姜麗娜;童冉;范正琪;殷恒福;李辛雷
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所
• 主分類號: A01G31/00
• 分類號: A01G31/00;A01G24/28;A01G24/15;A01H4/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

本發明涉及一種提高本氏煙組培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步驟：將生根2?3周的本氏煙組培苗，從組培瓶中取出后用流水沖洗以去除根部培養基；將種植土澆透水后將種植土放入在培養盆中；將處理后的本氏煙組培苗移栽至培養盆的種植土中，然后將培養盆移入人工培養箱或人工氣候室進行第一次過渡培養7?10天；第一次過渡培養后的本氏煙組培苗移出人工培養箱或人工氣候室，置于室內采光通風處，保持土壤濕潤，進行第二次過渡培養3?5天；第二次過渡培養后，將生長健壯的組培苗移置正常露天環境下，按常規進行澆水和施肥管理。本發明方法本氏煙組培苗的過渡培養，經人工培養箱、室內過渡，直接進行室外移栽，減少工作步驟，加快移栽過程，顯著提高移栽成活率。

技術領域

本發明屬于植物繁育培養技術領域，具體涉及一種提高本氏煙組培苗移栽成活率的室外移栽方法。

背景技術

本氏煙(Nicotiana benthamiana)為茄科(Solanaceae)煙草屬(Nicotiana)一年生或多年生的植物，本氏煙是當前植物基因工程育種中重要的模式植物。首先，本氏煙是植物病毒學中應用最廣泛的實驗寄主，其主要原因是能夠成功感染煙草的植物病毒種類繁多。此外，本氏煙對多種其他植物病原體(如細菌、卵菌、真菌等)敏感，這使得該物種成為宿主病原體研究的基石，特別是在先天免疫和防御信號的背景下。最主要的是由于它可以進行基因轉化和再生，具有良好的效率，并易于病毒誘導的基因沉默或瞬時蛋白表達的方法，本氏煙在植物生物學中迅速流行起來，特別是應用在蛋白亞細胞定位、植物蛋白質表達和基因功能驗證等研究中。

近年來，本氏煙作為一種模式植物被廣泛地應用于異源基因功能驗證的實驗中，本氏煙的轉化方法是利用農桿菌介導的葉盤法導入外源基因，誘導產生抗性愈傷組織，并繼代篩選出抗性植株，整個過程需要在嚴格抑菌、控溫、控濕的室內進行，而抗性小苗也一直需要在組培瓶中培養。當從瓶內無菌環境中移栽到室外有菌環境培養時，由于外界溫度、濕度、病菌的影響，組培小苗移栽到室外成活率很低，從而導致前期工作前功盡棄，后續工作也會受到嚴重影響。因此，本氏煙組培苗室外過渡培養、移栽在植物基因工程領域中是一項關鍵性基礎工作。

目前，在對煙草組培苗進行練苗移栽的過程中，往往需要對組培苗進行復雜的滅菌工作，如多菌靈溶液浸泡，反復無菌水沖洗等，忽略了對組培苗的保護，使組培苗在滅菌后受到不等程度的傷害，導致移栽成活率并不高，影響實驗進展。同時滅菌、練苗過程繁瑣，使移栽時間過長，影響了組培苗的生長過程。將組培苗移栽至室外，雖是進入有菌環境，但不應一味地對組培苗進行反復滅菌來達到抑菌的效果，應通過提高對組培苗的保護，使其生長健壯以抵抗病菌侵害。

本發明可不經過前期開瓶口膜的煉苗處理，開蓋處理過程中容易造成組培小苗葉片和根失水，而降低成活率。本發明采用直接開蓋，洗去培養基后，即種植到種植土中，不對組培苗進行反復滅菌，而是盡量保護組培小苗少受傷害，使其生長健壯以抵抗病菌侵害。在人工培養箱中進行過渡培養7-10天，人工培養箱中濕度、溫度適宜，并且與外界環境相對隔離，病菌較少，極利于組培小苗的過渡生長。再經室內適應培養3-5天后，即可移于正常露天環境下。本發明可顯著提高本氏煙組培苗室外移栽的成活率，達97.5～100％，簡化了移栽過程，極大地減小了工作量，節約時間和成本，2周左右即可完成從移苗、過渡培養到室外移栽的過程。

發明內容

為了解決上述存在的技術問題，本發明采用了以下方案：

一種提高本氏煙組培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步驟：

S1.將生根2-3周的本氏煙組培苗，從組培瓶中取出后用流水沖洗以去除根部培養基；

S2.將種植土澆透水后將種植土放入在培養盆中；

S3.將步驟S1處理后的本氏煙組培苗移栽至培養盆的種植土中，然后將培養盆移入人工培養箱或人工氣候室進行第一次過渡培養7-10天；