[發明專利]一種紙基耦合增強拉曼傳感器制備及其在大田軟海綿酸檢測中的應用

有效

• 申請號: 201911110895.3
• 申請日: 2019-11-14
• 公開（公告）號: CN110702665B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 趙珮妮;于京華;劉煥英
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

1.一種基于適配體特異性虜獲性能的紙基耦合增強拉曼傳感器制備方法，包括如下步驟：

（1）利用圖形軟件Adobe Illustrator CS6繪制各個功能區域，然后，利用固體蠟打印在色譜紙上同時制造50個初步紙芯片模型，對蠟打印圖形進行烘烤，使蠟浸透紙背，在色譜紙兩面形成疏水區域；

（2）在步驟（1）得到的紙芯片模型的功能區域內，利用金種子溶液對紙基表面進行納米金顆粒修飾，經過孵育，紙纖維上原位催化形成結構有序、排列致密、貫通纖維上下的納米金顆粒，獲得納米金-紙基固相基底，即“熱點”一級增強的SERS紙基底；

（3）將步驟（2）得到的紙芯片模型進行樹突狀銀材料修飾，在芯片模型修飾了納米金顆粒的區域依次滴加硝酸銀溶液和羥胺溶液，原位合成樹突狀銀材料，構筑高熱點密度的雙重耦合增強的SERS紙基底；

步驟（3）所述的硝酸銀的濃度為40 mmol/L，羥胺的濃度為4.0 mmol/L；

步驟（3）所述的硝酸銀溶液的用量為5 μL，羥胺溶液的用量為5 μL ；

（4）大田軟海綿酸的特異性DNA模擬酶鏈，定義為鏈1，其堿基序列如核苷酸序列表所示，將一定濃度的鏈1固定在紙芯片的樹突狀銀/納米金修飾的功能區域，隨后用巰基乙醇封鎖活性位點，滴加磷酸鹽緩沖溶液清洗；

（5）將一定濃度的染料修飾的互補DNA適配體鏈，定義為鏈2，其堿基序列如核苷酸序列表所示，滴加于鏈1修飾的功能區域，室溫下孵育3 h，用磷酸鹽緩沖溶液清洗；

（6）將一定濃度的大田軟海綿酸加入到步驟（5）所得功能區域中，室溫下反應2 h，用磷酸鹽緩沖溶液洗掉非特異性吸附的大田軟海綿酸及解離的鏈2；

（7）利用拉曼光譜儀在633 nm激光激發下，繪制拉曼強度對大田軟海綿酸濃度的標準曲線，實現海洋水體和海產貝類實際樣品中大田軟海綿酸濃度檢測。

2.根據權利要求 1 所述的基于適配體特異性虜獲性能的紙基耦合增強拉曼傳感器制備方法，其特征在于：權利要求 1步驟（4）中所述鏈1，其特征在于：其特定的堿基序列以及其5’端修飾上巰基。

3.根據權利要求 1所述的基于適配體特異性虜獲性能的紙基耦合增強拉曼傳感器制備方法，其特征在于：權利要求 1 步驟（5）中所述DNA鏈2，其特征在于：其特定的堿基序列以及其3’端修飾上cy3染料。