[發明專利]一種量子點標記的直接競爭熒光免疫檢測超氧化物歧化酶的方法

在審

• 申請號: 201911104833.1
• 申請日: 2019-11-13
• 公開（公告）號: CN112798779A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 翟晨;李夢瑤;王書雅;楊悠悠;謝云峰
• 申請（專利權）人: 中糧集團有限公司;中糧營養健康研究院有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/532;G01N21/64
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 孫雪;張淑珍

本發明涉及一種量子點標記的直接競爭熒光免疫檢測超氧化物歧化酶的方法，該方法使用CdSe/ZnS量子點標記超氧化物歧化酶，形成了超氧化物歧化酶?量子點熒光探針(QDs?SOD)復合物，通過QDs?SOD復合物和待測樣品液中的超氧化物歧化酶與包被的超氧化物歧化酶多克隆抗體進行直接競爭性地結合，來檢測待測樣品液中的超氧化物歧化酶的濃度。本發明的方法具有高靈敏度、高特異性和操作簡單等特點，可用于超氧化物歧化酶的快速檢測。

技術領域

本發明屬于免疫檢測方法技術領域，具體而言，本發明涉及量子點標記的直接競爭熒光免疫檢測超氧化物歧化酶的方法以及一種超氧化物歧化酶檢測試劑盒。

背景技術

超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)，廣泛存在于動植物的細胞與組織中，是生物防御體系的關鍵酶之一。SOD可以消除動植物在新陳代謝過程中產生的活性氧等有害物質，維持其正常的生命活動、增強植物防御能力和延緩衰老等作用。在動植物的生長過程中和番茄等農副產品的貯藏期間，由于細胞新陳代謝的影響，SOD的含量不斷發生變化。因此，超氧化物岐化酶的含量可以間接反映農副產品在在貯藏過程中的變化，所以SOD的含量是評判番茄等農副產品新鮮度的一個重要指標。

目前，國內外常用的超氧化物歧化酶檢測方法主要有：滴定法、氧化還原法、分光光度法和化學發光法等。然而，通過實際應用，發現這些現有的方法操作繁瑣、費時費力，準確度低，不是理想的檢測方法。國外已開展的對蛋白及酶類的分析方法的研究，常用的方法為酶聯免疫分析法(ELISA)。這類方法將抗體包被酶標板，加入蛋白及酶類進行特異性結合，再加入酶標抗體(即檢測抗體)，最后加入底物顯色，一定時間后，用酶標儀檢測某一特定波長的吸光度值，根據一直標準品含量計算樣品中待測藥物的濃度，此操作繁瑣，費時。

因此，目前仍需要一種檢測超氧化物岐化酶的方法，以實現超氧化物岐化酶的快速準確的檢測。

發明內容

本發明的目的是提供量子點標記的直接競爭熒光免疫檢測超氧化物歧化酶的方法，該方法具有高靈敏度、高特異性和操作簡單等特點，可用于超氧化物歧化酶的快速檢測。

具體而言，本發明提供了一種量子點標記的直接競爭熒光免疫檢測超氧化物歧化酶的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)用偶聯劑對量子點進行活化，得到活化后的量子點；

(2)將所述活化后的量子點與超氧化物歧化酶進行偶聯，得到超氧化物歧化酶-量子點熒光探針(QDs-SOD)復合物；

(3)用磷酸鹽緩沖液稀釋所述QDs-SOD復合物，得到QDs-SOD復合物稀釋液；

(4)在酶標板中對超氧化物歧化酶多克隆抗體進行包被，得到包被在所述酶標板中的超氧化物歧化酶多克隆抗體；

(5)將所述QDs-SOD復合物稀釋液和超氧化物歧化酶標準品溶液加入到所述酶標板中，通過與包被在所述酶標板中的超氧化物歧化酶多克隆抗體進行競爭性地結合，形成抗體-抗原發光免疫復合物；

(6)用熒光酶標儀激發并檢測所形成的抗體-抗原發光免疫復合物的熒光強度，以所述超氧化物歧化酶標準溶液中的超氧化物歧化酶的濃度為橫坐標，所獲得的熒光強度為縱坐標，繪制得到標準曲線；

(7)將步驟(5)中的所述超氧化物歧化酶標準品溶液替換為待測樣品液，以與步驟(5)和(6)相同的操作，獲得所述待測樣品液對應的熒光強度，通過與所述標準曲線對比求出所述待測樣品液中超氧化物歧化酶的濃度。

本發明還提供了一種超氧化物歧化酶檢測試劑盒，所述試劑盒包含(a)超氧化物歧化酶-量子點熒光探針復合物；(b)包被的超氧化物歧化酶多克隆抗體；(c)任選的超氧化物歧化酶標準品；以及(d)用于檢測超氧化物歧化酶的說明書。

有益效果