[發明專利]固載化的核酸適配體的連接臂及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201911102693.4
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN111039809B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 江峰;謝欣;易小慶;陳偉銘;陳壘;鐘佳寧;方小軍;郭宇;許小玲;彭維杰
• 申請（專利權）人: 贛南醫學院
• 主分類號: C07C231/02
• 分類號: C07C231/02;C07C233/18;C12N15/115;A61K47/54
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 鄒飛艷

1.一種固載化的核酸適配體的連接臂，其特征在于，該連接臂具有式1所示結構；

式1

其中，R1和R2各自獨立地選自直鏈或支鏈的C1-C10的烷基，R為氨基保護基團，n為2-6的整數；

所述氨基保護基團為氯或氟取代的乙酰基。

2.根據權利要求1所述的連接臂，其中，R1和R2各自獨立地選自直鏈或支鏈的C1-C5的烷基。

3.一種權利要求1所述的固載化的核酸適配體的連接臂的制備方法，其特征在于，該方法包括：

（1）在第一催化劑的存在下，使丙烯腈或者ω-易離去基團取代的C3-C7的腈與丙酮縮甘油進行第一接觸以發生反應，得到如式2所示的第一中間產物；

式2

（2）在第二催化劑的存在下，使所述第一中間產物和還原劑發生還原反應，以將所述第一中間產物中的氰基還原為氨基，得到如式3所示的第二中間產物；

式3

（3）在惰性氣體的保護下以及第一有機堿的存在下，將所述第二中間產物與能夠提供氨基保護基團R的化合物進行第二接觸，以使得氨基保護基團R與氨基相連從而對所述第二中間產物中的氨基進行保護，得到如式4所示的第三中間產物；

式4

（4）將所述第三中間產物與酸進行第三接觸，以脫除丙酮保護基，得到第四中間產物；

（5）在取代反應的條件下，將所述第四中間產物與式5所示的化合物接觸，以使所述第四中間產物取代式5所示的化合物的X基團，得到式6所述的第五中間產物；

式5???????????????式6

（6）在第二有機堿的存在下，使所述第五中間產物與丁二酸酐發生酯化反應，得到如式7所示的第六中間產物；

式7

（7）在第三有機堿的存在下，將所述第六中間產物和氨基化的CPG接觸并使得所述第六中間產物中的羧基與氨基化的CPG中的氨基進行酰胺化反應，得到式1所示的固載化的核酸適配體的連接臂；

式1，

上述式中，R1和R2各自獨立地選自直鏈或支鏈的C1-C10的烷基，R為氯或氟取代的乙酰基，n為2-6的整數，ω為C3-C7的腈中與易離去基團連接的C碳原子，X為鹵素。

4.根據權利要求3所述的方法，其中，

步驟（1）中：

所述第一催化劑為堿性催化劑；

步驟（2）中：

所述第二催化劑為金屬催化劑；

步驟（4）中：

所述酸為鹽酸、三氯乙酸、三氟乙酸、乙酸和甲酸中的至少一種；

步驟（5）中：

R1和R2各自獨立地選自直鏈或支鏈的C1-C5的烷基；

步驟（6）中：

所述第二有機堿為吡啶、三乙胺和4-二甲氨基吡啶中的至少一種；

步驟（7）中：

所述第三有機堿為吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶或者它們任意的混合物。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟（1）中所述第一催化劑為氫化鈉、氫化鉀、金屬鈉、金屬鉀、叔丁醇鉀和二異丙胺鋰中的至少一種。

6.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟（1）中所述易離去基團選自溴、碘、氯、對硝基苯磺酰基和對甲基苯磺酰基中的一種。

7.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟（1）中相對于1mol的丙酮縮甘油，丙烯腈或者ω-易離去基團取代C3-C7的腈的用量為1-3mol，所述第一催化劑的用量為0.1-0.3mol。

8.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟（1）中所述第一接觸的條件包括：溫度為20-40℃，時間為1-3h。

9.根據權利要求4所述的方法，其中，所述金屬催化劑為氯化鈷、三氯化鋁和氯化鋅中的至少一種。

10.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟（2）中所述還原劑為硼氫化鈉、硼氫化鉀和四氫鋁鋰中的至少一種。