[發(fā)明專利]尿液樣本RNA穩(wěn)定液及制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911102059.0
• 申請(qǐng)日: 2019-11-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110760567A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱友杰;孔繁平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州昱鼎生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806
• 代理公司: 32338 常州易瑞智新專利代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 徐琳淞

本發(fā)明本發(fā)明公開(kāi)了一種尿液樣本RNA穩(wěn)定液及制備方法，包括：0.01M?2M的二硫蘇糖醇、2M?6M的異硫氰酸胍、1?200mM的乙二胺四乙酸、0.05?0.5mM的焦碳酸二乙酯和超純水。本發(fā)明的制備步驟包括：在超純水中加入一定量的上述化學(xué)試劑，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至4?4.2后定容，密封保存。本發(fā)明提供的尿液樣本RNA穩(wěn)定液，可以有效保持尿液樣品中RNA的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)大體積尿液的保存和運(yùn)輸，并且適合后續(xù)RNA提取和熒光RT?PCR。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及RNA類樣本穩(wěn)定液，尤其涉及一種尿液樣本RNA穩(wěn)定液及制備方法。

背景技術(shù)

液體活檢，就是利用人體體液(血液、尿液等體液)作為標(biāo)本來(lái)源檢測(cè)獲取腫瘤相關(guān)信息的技術(shù)，它是一種簡(jiǎn)單且非侵入性的組織活檢替代方法。具有患者依從性好，特異性好，異質(zhì)性低，可反復(fù)取材等優(yōu)勢(shì)。因此，通過(guò)液體活檢技術(shù)來(lái)進(jìn)行癌癥的早期篩查具有非常良好的發(fā)展前景。

尿液由腎臟產(chǎn)生，經(jīng)由輸尿管到膀胱儲(chǔ)存，然后經(jīng)過(guò)尿道排除體外。由于尿液的生理特質(zhì)，尿液樣本對(duì)于泌尿系統(tǒng)腫瘤是十分優(yōu)秀的液態(tài)活檢樣本來(lái)源，因此泌尿系統(tǒng)腫瘤，如膀胱癌，前列腺癌等都致力于在尿液樣本中尋求合適的分子標(biāo)志物。尤其時(shí)前列腺癌，由于前列腺在身體內(nèi)部，體積小，發(fā)生癌變時(shí)很難通過(guò)其他手段早期發(fā)現(xiàn)，然而前列腺直接和尿道相通，前列腺成分可以從尿液中檢測(cè)到，因此，尿液中的核酸分子可以作為前列腺癌的生物標(biāo)志物。

然而尿液體積大，核酸濃度低，其中前列腺來(lái)源的成分更少，尤其是前列腺特異的RNA分子，本身含量就不高，再加上RNA容易降解，非常容易檢測(cè)不到，目前尿液RNA檢測(cè)對(duì)于尿液樣本要求很高，通常需要在冷藏條件下保存，并須當(dāng)天送檢并完成檢測(cè)，限制了尿液RNA檢測(cè)的應(yīng)用，因此開(kāi)發(fā)一種能夠穩(wěn)定尿液中RNA分子的穩(wěn)定液對(duì)于拓展尿液樣本液體活檢具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有尿液樣本RNA穩(wěn)定液無(wú)法長(zhǎng)時(shí)間保存的尿液RNA的問(wèn)題，提供尿液樣本RNA穩(wěn)定液，能有效保持尿液樣品中RNA的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)大體積尿液的保存和運(yùn)輸，并且適合后續(xù)RNA提取和熒光RT-PCR。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是尿液樣本RNA穩(wěn)定液，包括：0.01M-2M的二硫蘇糖醇、2M-6M的異硫氰酸胍、1-200mM的乙二胺四乙酸和超純水。

所述尿液樣本RNA穩(wěn)定液還包括0.05-0.5mM的焦碳酸二乙酯。

所述尿液樣本RNA穩(wěn)定液的pH值為3-5。

所述尿液樣本RNA穩(wěn)定液優(yōu)選為由0.1M的二硫蘇糖醇、2M的異硫氰酸胍、0.2mM的焦碳酸二乙酯、100mM的乙二胺四乙酸和超純水組成。

所述的尿液樣本RNA穩(wěn)定液的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：配置AmL超純水；

步驟二：稱取二硫蘇糖醇、異硫氰酸胍、乙二胺四乙酸,加入步驟一的超純水中攪拌溶解；

步驟三：稱取焦碳酸二乙酯，加入步驟二的溶液中混勻；

步驟四：用鹽酸調(diào)節(jié)PH至4-4.2；

步驟四：定容至2AmL密封保存；

其中，確保穩(wěn)定液滿足：0.01M-2M的二硫蘇糖醇、2M-6M的異硫氰酸胍、1-200mM的乙二胺四乙酸、0.05-0.5mM的焦碳酸二乙酯。

采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有如下技術(shù)效果:

1、本發(fā)明提供的尿液樣本RNA穩(wěn)定液能有效保持尿液樣品中RNA的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)大體積尿液的保存和運(yùn)輸，并且適合后續(xù)RNA提取和熒光RT-PCR。

2、本發(fā)明采用二硫蘇糖醇作為還原劑，可還原蛋白質(zhì)二硫鍵，從而改變尿液中RNA酶的構(gòu)象，使其失活，保證RNA的長(zhǎng)時(shí)間保存。