[發(fā)明專利]一種酶法制備羅漢果苷IV和苷V的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911099803.6 | 申請日： | 2019-11-12 |
| 公開（公告）號： | CN110669809B | 公開（公告）日： | 2022-12-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊峰;李文娟;張琚政;孫澤文;蔡美玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西師范大學(xué) |
| 主分類號： | C12P19/56 | 分類號： | C12P19/56 |
| 代理公司： | 桂林市華杰專利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112 | 代理人： | 楊雪梅 |
| 地址： | 541004 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 法制 羅漢果 iv 方法 | ||
1.一種酶法制備羅漢果苷IV和苷V的方法，其特征在于：是利用酶催化羅漢果苷IIE、III生成羅漢果苷IV、V，所述酶來源自UDP葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶UGT032，核苷酸DNA序列如SEQ IDNO.1所示，氨基酸PRT序列如SEQ ID NO.2所示；
具體方法是：
先制備粗酶液，再用粗酶液分別催化羅漢果苷IIE、III生成羅漢果苷IV、V；
所述粗酶液的制備方法具體是，將酶基因UGT032構(gòu)建至pET22b上，重組質(zhì)粒命名為pET22b-UGT032；
再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞Top10中克隆質(zhì)粒，搖瓶培養(yǎng)收集菌體，提質(zhì)粒并在-80℃中保存；
將提取的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達(dá)宿主BL21p中誘導(dǎo)、表達(dá)，收集菌體，按菌體重量的4倍加入破菌液，利用均質(zhì)機(jī)破裂細(xì)胞制得粗酶液；
所述用粗酶液催化羅漢果苷IIE、III生成羅漢果苷IV、V的方法具體是，在三口瓶中加入底物羅漢果苷IIE或III，加入粗酶液，尿苷二磷酸，蔗糖合成酶，繼續(xù)加入pH=7.5的磷酸緩沖溶液，攪拌，35℃水浴；水浴反應(yīng)8-12h后，即可用HPLC檢測苷IIE或III的轉(zhuǎn)化率。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于廣西師范大學(xué)，未經(jīng)廣西師范大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201911099803.6/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 同類專利
- 專利分類
