[發明專利]一種臨床級干細胞無血清培養基

有效

• 申請號: 201911099510.8
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN112852719B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 孔德照;陳杰;方松剛
• 申請（專利權）人: 武漢濟源高科技有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開一種臨床級干細胞無血清培養基。本發明的培養基以L?DMEM、IMDM、DMEM?F12或α?MEM、mTeSR^TM1培養基、E8培養基和KSR條件培養基等為基礎培養基，去除肌醇、亞油酸等脂類物質和合成脂類物質成分，同時含有以下添加成分：聚乙烯醇、骨形態發生蛋白BMP?4、維生素C、維甲酸、煙酰胺、阿奇霉素。該培養基成分明確，質量可控，不含動物血清成分，可以培養包括多能干細胞和專能干細胞在內各種干細胞，多次傳代后可以維持干細胞的“干性”不產生分化的能力。

技術領域

本發明涉及細胞培養用培養基，具體涉及一種臨床級干細胞無血清培養基，屬于生物醫藥領域。

背景技術

目前的基礎培養基沒法支撐干細胞的長期培養，還有優化的空間。而現在更多的是研究關注補充液對干細胞的影響。在傳統的干細胞培養過程中通常需要添加一定量的胎牛血清，但是胎牛血清有幾個劣勢：成本高、批次變異、可用性有限、血清易受病毒、支原體及其他病原體污染以及引起異種免疫反應的可能性問題，同時血清中含有大量的氨基酸、核苷、蛋白質、激素、脂類等微量成分，這些成分的含量和具體作用仍沒有完全確定，血清中含有的脂類物質能夠促進細胞分化。為了避免以上胎牛血清使用中的缺陷，現在開發了可替代動物血清的培養基，最常用的是人AB血清、人血小板裂解物和無血清的化學限定培養基，但是各有缺點，AB血清和人血小板裂解物均存在病毒污染的可能性，而且不同批次之間有明顯的差異；人血小板裂解物釋放的多種生長因子可能有抑制細胞生長的物質，以及改變細胞表面標志物表達和細胞功能等；目前化學限定培養基雖然不含血清，能避免血清制品帶來的潛在風險，但是也不完美，其可促進干細胞分化，提高免疫原性，不能很好的維持干細胞的干性。因此成分確定，質量安全可控，能夠大規模擴增培養干細胞且始終維持“干性”的臨床級培養基是臨床應用的必然選擇。

發明內容

針對以上缺點改進，本發明的目的是提供一種臨床級干細胞無血清培養基，該培養基不含動物和人血清制品成分，同時去除影響細胞分化的脂類物質成分和合成脂類的物質成分，成分明確、質量安全可控，既提高了干細胞的正常生長和快增值能力，同時保證干細胞的純度和干性，適合臨床干細胞的大規模生產和應用。

附圖說明

圖1是臍帶間充質干細胞傳代培養中細胞培養首次達到80％融合度時的顯微鏡觀察照片以及 P10 代的顯微鏡觀察照片；

圖2是臍帶間充質干細胞傳代培養中細胞培養首次達到80％融合度時以及 P10代的流式檢測結果；

圖3是IPS細胞復蘇后首次達到80％融合度時的顯微鏡觀察照片；

圖4是IPS細胞傳代培養中細胞培養至P20代的顯微鏡觀察照片。

具體實施方式

以下實施例是對本發明進一步詳細說明，而不是對本發明的限制。

實施例1：

本實施例的一種臨床級干細胞無血清培養基，以DMEM-F12培養基為基礎培養基，并去除DMEM-F12培養基中影響細胞分化的脂類物質成分和合成脂類的物質成分：包括肌醇、亞油酸，同時含有添加成分，添加成分以及其含量（最終濃度）如下：聚乙烯醇5ng/ml、BMP-4 10ug/ml、維生素C 40ug/ml、維甲酸1uM、煙酰胺5ug/ml、阿奇霉素20ug/ml。

具體配置方法是，在配置DMEM-F12培養基時，不添加肌醇和亞油酸成分，或者DMEM-F12培養基用活性炭脫脂處理。在不含脂類成分和合成脂類的物質成分的DMEM-F12培養基中添加上述成分，使其終濃度為以上濃度，由此得到一種臨床級干細胞無血清培養基。

實施例2：