[發(fā)明專(zhuān)利]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因在培育抗病性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911099413.9
• 申請(qǐng)日: 2019-11-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112795570B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘巧娜;崔北米;加利·約翰·洛克
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/29
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/29;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/20
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擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因在培育抗病性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用，通過(guò)將擬南芥AT5G59820基因的CDS序列通過(guò)Gateway技術(shù)構(gòu)建到帶有FLAG蛋白標(biāo)簽的上游，并轉(zhuǎn)化擬南芥植物，篩選并鑒定，最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。對(duì)篩選到的植物進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)其具有增強(qiáng)擬南芥對(duì)番茄丁香假單胞菌番茄亞種的抗性，即該基因影響植物的抗病表型，農(nóng)作物中同源基因可能具有同樣或相似的功能，因此在生產(chǎn)中具有重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于遺傳工程領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因在培育抗病性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

我國(guó)作為人口大國(guó)，每年對(duì)糧食的需求量巨大。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)作物的產(chǎn)量會(huì)受各種因素的影響導(dǎo)致減產(chǎn)，其中病蟲(chóng)害是影響全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要因素之一?，F(xiàn)在對(duì)農(nóng)作物病蟲(chóng)害的防治主要采取化學(xué)藥劑或生物防治的辦法，但是這兩種常見(jiàn)方法會(huì)引起二次污染，或其他一些生態(tài)危害。因此利用現(xiàn)代生物技術(shù)挖掘廣譜抗性基因，為傳統(tǒng)育種技術(shù)提供指導(dǎo)是十分必要的?，F(xiàn)在已有一些廣譜的抗病基因被挖掘到。對(duì)抗病相關(guān)基因進(jìn)行進(jìn)一步挖掘及拓展，為育種工作者提供更多的選擇對(duì)未來(lái)的農(nóng)作物生產(chǎn)具有重大意義。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人針對(duì)篩選獲得的一個(gè)擬南芥轉(zhuǎn)錄抑制因子AT5G59820進(jìn)行了基因克隆、轉(zhuǎn)基因植物構(gòu)建及初步的抗病分析，發(fā)現(xiàn)該基因在植物抗病中發(fā)揮功能，該基因在不同物種中具有一定的保守性，后期或可進(jìn)行農(nóng)作物的抗病育種及改良。

作為本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因在培育抗病性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述應(yīng)用具體包括，克隆轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因的CDS序列，其序列如SEQ ID No.1所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)堿基形成的具有同等功能的核苷酸序列；利用Gateway技術(shù)構(gòu)建融合表達(dá)載體，該載體可在植物中表達(dá)融合蛋白AT5G59820-Linker-FLAG，其中l(wèi)inker為Gateway載體重組位點(diǎn)編碼的氨基酸序列YPAFLYKVVDNS，F(xiàn)LAG標(biāo)簽的氨基酸序列為DYKDDDDK，AT5G59820為擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820編碼的氨基酸序列；轉(zhuǎn)化植物，篩選，鑒定，獲得具有抗病性的轉(zhuǎn)基因植物。

作為本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了前述載體及含有該載體的工程菌及含有該載體的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明對(duì)擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820進(jìn)行克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建，并轉(zhuǎn)化到植物中進(jìn)行研究，對(duì)篩選到的植物進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)其可增強(qiáng)植物的抗病性，對(duì)農(nóng)作物中同源基因可能具有同樣的功能，因此在生產(chǎn)中具有重要的意義。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中pGWB11的載體圖譜；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中AT5G59820-pGWB11載體圖譜。

具體實(shí)施方式：

本發(fā)明提供的項(xiàng)目實(shí)施方案用于說(shuō)明本發(fā)明，但是不局限于本發(fā)明的研究范圍。如果沒(méi)有特別指出，本發(fā)明實(shí)施中的技術(shù)手段為本研究領(lǐng)域的常用技術(shù)，所用原料為市場(chǎng)所購(gòu)。

實(shí)施例1擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因序列的獲得以及植物表達(dá)載體的構(gòu)建。

登錄擬南芥信息資源數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站

https://www.arabidopsis.org/servlets/TairObject？type＝sequenceid＝125264，找到轉(zhuǎn)錄因子AT5G59820基因的序列(SEQ ID No.1)，根據(jù)AT5G59820基因的CDS設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物，

AT5G59820-F:5'-ATGGTTGCGATATCGGAGATC-3'

AT5G59820-R:5'-ATAAACTGTTCTTCCAAGCTC-3'