[發明專利]基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝

在審

• 申請號: 201911098523.3
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN110824046A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 龔千鋒;于歡;葉耀輝;嚴麗萍
• 申請（專利權）人: 江西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;A61K36/233;A61K35/586
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 王雷

1.基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝，其特征在于，包括以下步驟：

S1、鱉血柴胡飲片的制備；

S2、柴胡皂苷含量的測定；

其中，步驟S2柴胡皂苷含量的測定，包括以下步驟：

S201、對照品溶液的制備：分別精密稱取柴胡皂苷a對照品2.00mg，柴胡皂苷d對照品2.94mg，置于5mL量瓶中，用適量甲醇將其溶解，再用甲醇定容至刻度，過0.22μm微孔濾膜，備用；

S202、供試品溶液的制備：取不同條件下炮制的鱉血柴胡藥材粉末約0.5g，稱重，置于錐形瓶中，加入5%濃氨的甲醇溶液25mL，密塞，超聲200W，40kHz提取30min，干燥濾器抽濾，用甲醇20mL少量多次洗滌容器及藥渣，合并洗濾液，揮干溶劑，殘渣用少量甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，4℃儲存備用；

S203、HPLC測定：通過色譜柱和流動相進行制備對照品溶液與鱉血柴胡炮制品的HPLC圖；

S204、線性關系考察：將取配制好的柴胡皂苷a、d的對照品溶液，分別進樣30、25、20、10、5、1μL，進行步驟S203HPLC測定，以峰面積為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標，作線性回歸，得標準曲線。

2.根據權利要求1所述的基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝，其特征在于，步驟S1包括以下步驟：取柴胡飲片適量于干燥燒杯中，淋入新鮮潔凈鱉血稍悶潤至吸干水分為度，放入銅鍋中，適宜溫度下炒制一定時間，取出，放涼，制得鱉血柴胡飲片，其中，鱉血加少許水稀釋后再與藥物拌勻。

3.根據權利要求1所述的基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝，其特征在于，色譜柱規格為250mm×4.6mm，5μm，流動相為乙腈-水50：50，柱溫：30℃，流速：1.0mL/min，檢測波長：210nm，進樣量：20μL。

4.根據權利要求1所述的基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝，其特征在于，還包括以下步驟：

精密度試驗：取同一供試品溶液，連續進樣6次，柴胡皂苷a、d峰面積的ＲSD分別為1.6%、0.6%，用于確定儀器精密度合格；

穩定性試驗：取同一供試品溶液，于0、2、4、8、12、24h進行HPLC測定，得柴胡皂苷a、d峰面積的ＲSD分別為1.5%、2.5%，用于確定供試品溶液在24h內穩定性良好。

5.根據權利要求4所述的基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝，其特征在于，還包括以下步驟：S3、試驗數據分析并建立回歸模型：預先通過單因素預試驗的基礎上，以鱉血用量A、炒制溫度B、炒制時間C為考察因素，柴胡皂苷a、d的含量之和為響應指標，建立響應曲面法因素水平編碼并完成進行回歸分析以及建立回歸模型。

6.根據權利要求5所述的基于響應面法優化鱉血柴胡炮制工藝，其特征在于，其中，回歸模型包括以下計算方式：以柴胡總皂苷含量Y柴胡皂苷a、d之和為響應值，鱉血用量A、炒制溫度B、炒制時間C為自變量，得擬合方程：Y=－22.95491+0.55355A+0.051675B+2.56412C－2.71250×10^－3AB－7.65000×10^－3AC－2.88750×10^－3BC－3.09500×10^－3A²+8.28125×10^－5B²－0.073156C²。