[發明專利]非洲豬瘟病毒VP72和CD2V基因的雙重實時熒光檢測引物探針組、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201911098281.8
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN110791590B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 黃震巨;李春燕;李沛;林曉;滕麗瓊
• 申請（專利權）人: 南寧眾冊生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

1.一種非洲豬瘟病毒VP72和CD2V基因的雙重實時熒光檢測引物探針組，其特征在于，針對VP72基因，正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1，反向引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，特異性熒光探針核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，針對CD2V基因，正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，反向引物核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，特異性熒光探針核苷酸序列如SEQ ID No.12，其中，所述特異性熒光探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述特異性熒光探針的熒光報告基團選自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一種，熒光淬滅基因選自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一種。

3.一種非洲豬瘟病毒VP72和CD2V基因的雙重實時熒光檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1或2所述的引物探針組。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品為含有非洲豬瘟病毒VP72基因保守區序列的陽性質粒和含有非洲豬瘟病毒CD2V基因保守區序列的陽性質粒的混合質粒，其中，所述含有非洲豬瘟病毒VP72基因保守區序列的陽性質粒的堿基序列如SEQID NO.13所示，所述含有非洲豬瘟病毒CD2V基因保守區序列的陽性質粒的堿基序列如SEQID NO.14所示。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照品為ddH₂O。

7.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR緩沖液、PCR底物、MgCl₂、DNA聚合酶和/或水解酶。

8.一種非洲豬瘟病毒VP72和CD2V基因的雙重實時熒光檢測方法，其特征在于，所述方法用于非疾病診斷用途，包括如下步驟：提取待測樣本的DNA，以待測樣本的DNA為模板，采用如權利要求3～7任一項所述的試劑盒進行實時熒光PCR反應，根據實時熒光PCR擴增曲線分析待測樣本，確定待測樣本中存在的是非洲豬瘟 病毒野毒株還是CD2V基因缺失疫苗株。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述實時熒光PCR反應的程序為：50℃，1min；95℃，5min；95℃，15s，60℃，30s，共計45個循環。

10.如權利要求1或2所述的引物探針組，或權利要求3～7任一項所述的試劑盒在制備用于檢測非洲豬瘟病毒VP72基因和CD2V基因的試劑中的應用。