[發明專利]流感病毒小體包被的仿生納米疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201911097481.1
• 申請日: 2019-11-11
• 公開（公告）號: CN110772635B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 陳剛;周昕;李真真
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K39/125
• 分類號: A61K39/125;A61K9/14;A61K47/02;A61P31/16
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種流感病毒小體包被的仿生納米疫苗，其特征在于，所述仿生納米疫苗包括流感病毒小體、小粒徑氟化顆粒及DNA疫苗，所述仿生納米疫苗為核殼結構的納米體系，所述流感病毒小體為含有流感病毒囊膜蛋白的脂質囊泡，所述納米體系的內核為負載DNA疫苗的小粒徑氟化顆粒，所述流感病毒小體包裹于內核表面，所述流感病毒小體來源于流感病毒，所述流感病毒包括H1N1、H3N2、H5N1、H7N9或H9N2亞型，所述小粒徑氟化顆粒為氟化修飾的陽離子聚合物包裹金顆粒形成的納米結構，所述陽離子聚合物為基因載體，包括聚胺類、聚酰胺-胺類、超支化聚酰胺-胺、聚甲基丙烯酸酯類、聚氨基酸類、聚酯類或天然多糖類中的一種或幾種，所述金顆粒粒徑為10~30 nm。

2.權利要求1所述的流感病毒小體包被的仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）VI的制備：將流感病毒加1,2-二己酰卵磷脂冰浴，超速離心1.5 h，收集上清，將上清置于HBS緩沖液中透析，去除1,2-二己酰卵磷脂，獲得重組的VI；

2）氟化修飾的陽離子聚合物合成：按照陽離子聚合物中氨基、七氟丁酸酐及三乙胺摩爾比為1:3:1.2進行反應，反應介質為甲醇，室溫攪拌，反應結束后，將反應產物在pH 3~4的去離子水中透析，冷凍干燥獲得氟化修飾的陽離子聚合物；

3）FAu制備：取粒徑為10~30 nm的金顆粒緩慢滴加到氟化修飾陽離子聚合物中，緩慢輕搖，離心，收集沉淀即為小粒徑的氟化顆粒FAu；

4）負載DNA疫苗的FAu制備：取步驟3）中的FAu，與DNA疫苗混合，緩慢輕搖，陽離子聚合物與DNA質量比為1.5~3，獲得負載DNA疫苗的小粒徑氟化顆粒；

5）流感病毒小體包被的仿生納米疫苗的制備：取步驟1）中重組的VI與步驟4）中小粒徑氟化顆?；旌?，用擠出儀來回擠出，離心收集得到流感病毒小體包被的仿生納米疫苗。

3.根據權利要求2所述的流感病毒小體包被的仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟3）的氟化修飾陽離子聚合物濃度為5~10 mg/mL。

4.根據權利要求2所述的流感病毒小體包被的仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟4）的DNA疫苗包括流感病毒的核蛋白、基質蛋白、膜蛋白、血凝素或神經氨酸酶的全長DNA序列或其部分DNA序列。

5.根據權利要求2所述的流感病毒小體包被的仿生納米疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟5）的擠出儀濾膜孔大小為50~100 nm。