[發(fā)明專(zhuān)利]一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911097269.5
• 申請(qǐng)日: 2019-11-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110846363B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-02-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬媛媛;宋浩;洪解放;汪振洋;來(lái)慶英;張敏華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津大學(xué);中化健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/10;C12P19/56;C12N15/54;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/865;C12R1/84;C12R1/125
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專(zhuān)利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 曹玉平

1.一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征是包括如下步驟：

(1)構(gòu)建能分泌表達(dá)糖基轉(zhuǎn)移酶UGT1的重組菌1，所述糖基轉(zhuǎn)移酶UGT1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重組菌1用下述步驟構(gòu)建：表達(dá)所述糖基轉(zhuǎn)移酶UGT1的基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；所述基因連接至pPICZalphaA，獲得序列表中SEQ IDNO.3所示的4954bp的pP-UGT1質(zhì)粒；所述pP-UGT1質(zhì)粒包含SEQ ID NO.6所示的分泌表達(dá)糖基轉(zhuǎn)移酶UGT1所用的信號(hào)肽alpha因子的核苷酸序列；所述pP-UGT1質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10F′得到的轉(zhuǎn)化子，并從轉(zhuǎn)化子中提取pPIC-UGT1質(zhì)粒；用PmeI酶切成線(xiàn)性的SEQ IDNO.3所示的4954bp片段，將4954bp片段與巴斯德畢赤酵母宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞混勻，進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化，獲得重組菌1；

(2)在pH3.5-7.8的培養(yǎng)基中培養(yǎng)重組菌1,得到培養(yǎng)液；

(3)在步驟(2)獲得的培養(yǎng)液中加入底物萊鮑迪苷A，加入尿苷二磷酸葡萄糖，硫酸鎂或氯化鎂，甲醇，反應(yīng)，得到萊鮑迪苷D。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是步驟(3)為：在步驟(2)獲得的培養(yǎng)液中加入終濃度為0.3-20g/L的底物萊鮑迪苷A，加入終濃度為0.2-1.5mM的尿苷二磷酸葡萄糖，加入終濃度為0.5-5mM的硫酸鎂或氯化鎂，每24小時(shí)加入終濃度為0.5％-1.5％的甲醇，反應(yīng)，得到萊鮑迪苷D。