[發明專利]一種高產脂肪酶的里氏木霉菌株及其應用

有效

• 申請號: 201911084730.3
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN112779166B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 李瑞;宋清清;徐曉東;張金祥;黃亦鈞
• 申請（專利權）人: 青島蔚藍生物集團有限公司;濰坊康地恩生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N13/00;C12N9/20;C12R1/885
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本發明屬于微生物工程改造技術領域，提供了一種高產脂肪酶的里氏木霉菌株及其應用。所述菌株的保藏編號為CCTCC NO：M2019894，能高效表達脂肪酶，有利于促進脂肪酶的廣泛應用。

技術領域

本發明屬于微生物工程改造技術領域，具體涉及一種高產脂肪酶的里氏木霉菌株及其應用。

背景技術

脂肪酶（Lipase）全稱甘油三酰酯水解酶（Triacylglycerol acylhydrolase），是最早研究的酶類之一。此類酶主要作用于甘油酰酯鍵，該酶可以催化水解底物分解為脂肪酸和甘油酯（三酰甘油酯、二酰甘油酯、單酰甘油酯）。同時，脂肪酶還具有催化酯水解、酯合成、轉酯化、氨解、醇解、藥物合成等作用。

脂肪酶的主要來源有植物、動物和微生物。微生物種類多、繁殖快、易變異，其分泌的脂肪酶具有底物廣譜性大，可適應不同的pH值與溫度范圍的特點，有些極端環境獲取的菌株其酶學特性更加突出。因此，微生物脂肪酶適合于工業酶的制備生產和獲得高純度樣品。

產脂肪酶的微生物分布廣泛，已達60余個屬，其中酵母菌有10個屬、其它真菌有23個屬、放線菌有4個屬、細菌有28個屬。其中，產脂肪酶真菌由于其菌絲體易從培養基液中分離且來源廣泛，被認為是最具生產潛力的微生物脂肪酶菌種。高產脂肪酶的真菌菌株多來源于根酶（Rhizopus）、曲霉（Aspergillus）、青霉（Penicillium）、毛霉（Mucor）、地霉（Geotrichum）。

天然微生物篩選的經典方法已經建立得十分完備，這套方法起源于1945年發現抗生素后的十年中。它已用于檢測成千上萬的土壤、植物材料等樣品，以及隨機分離和篩選菌群。對于產脂肪酶菌株的分離方法一般為：從土壤或者水域中收集樣品，之后利用三角燒瓶富集培養，對富集培養物進行選擇性平板分離，其分離結果通過觀察透明圈或變色圈大小判斷，最后進行搖瓶復篩并測定酶活大小。其中主要通過脂肪底物中釋放的脂肪酸造成pH的降低，從而改變指示劑顏色，借此對其活性進行監測。利用這套篩選方法，霉菌、細菌、酵母各種不同生長性狀的產脂肪酶微生物被人們篩選獲得。目前應用定向進化技術，可以根據不同的研究目的，更為有效的直接獲取產脂肪酶菌種或脂肪酶

對微生物脂肪酶的研究，不僅可以為物種多樣性補充基礎研究內容，還可以利用微生物脂肪酶的特殊性質，應用于生物煉制和工業化生產等重要方面。由于其特殊的界面反應特性，已在食品與營養品加工工業、油脂化工工業、日用化工產業、醫藥與農業、生物活性劑合成等許多領域得到廣泛應用。

與國外相比，我國對脂肪酶的研究和開發較晚，而且工業化的微生物脂肪酶制劑種類有限，因此，篩選具有新特性的活力高、產量高及成本低的脂肪酶菌種是十分必要的。本發明提供了一株高產的脂肪酶生產菌株，對推動脂肪酶工業化生產起積極作用。

發明內容

本發明為解決現有技術問題，提供了一種高產脂肪酶的里氏木霉（Trichoderma reesei）菌株。申請人首先構建得到重組表達脂肪酶的里氏木霉工程菌株，然后通過紫外誘變的方法篩選獲得一株脂肪酶產量得到顯著提高的突變菌株，可廣泛應用于脂肪酶的生產。

為了實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：

本發明一方面提供了一種里氏木霉工程菌，所述菌株攜帶有表達脂肪酶基因的重組載體。

本發明一方面提供了一種突變菌株里氏木霉UE-M8（Trichoderma reesei UE-M8），已于2019年11月4日保藏于中國武漢 武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: M 2019894。

本發明還提供了所述里氏木霉突變菌株在生產脂肪酶中的應用。