[發(fā)明專利]一種環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911084700.2
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN110804597B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓瑞枝;柴寶成;倪曄
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/60;C12P19/18
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體是通過將出發(fā)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的第156位丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸以及第174位亮氨酸突變?yōu)楦彼岬玫降模?/p>

或者，所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體是通過將出發(fā)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的第156位丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸、第174位亮氨酸突變?yōu)楦彼嵋约暗?66位丙氨酸突變?yōu)槔野彼岬玫降模?/p>

或者，所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體是通過將出發(fā)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的第156位丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸、第174位亮氨酸突變?yōu)楦彼嵋约暗?66位丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸得到的；

或者，所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體是通過將出發(fā)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的第156位丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸、第174位亮氨酸突變?yōu)楦彼嵋约暗?66位丙氨酸突變?yōu)楦拾彼岬玫降模?/p>

或者，所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體是通過將出發(fā)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的第156位丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸、第174位亮氨酸突變?yōu)楦彼嵋约暗?66位丙氨酸突變?yōu)橘嚢彼岬玫降摹?/p>

2.編碼權(quán)利要求1所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體的基因。

3.攜帶權(quán)利要求2所述基因的重組質(zhì)粒。

4.如權(quán)利要求3所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒的載體為pET-20b(+)質(zhì)粒、pET-22b(+)質(zhì)粒或pET-28a(+)質(zhì)粒。

5.攜帶權(quán)利要求4所述基因或權(quán)利要求3或4所述重組質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。

6.如權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為細(xì)菌或真菌。

7.權(quán)利要求1所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體的制備方法，其特征在于，所述方法為將權(quán)利要求5或6所述的宿主細(xì)胞接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵液；將發(fā)酵液進(jìn)行離心，獲得發(fā)酵上清液；將發(fā)酵上清液進(jìn)行分離，獲得權(quán)利要求1所述的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體。

8.一種生產(chǎn)長鏈糖基化染料木素的方法，其特征在于，所述方法為以麥芽糊精作為糖基供體，以染料木素作為糖基受體，在含有麥芽糊精和染料木素的反應(yīng)體系中加入權(quán)利要求1所述的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體進(jìn)行反應(yīng)，得到反應(yīng)液；將反應(yīng)液進(jìn)行分離，獲得長鏈糖基化染料木素。

9.權(quán)利要求1所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體或權(quán)利要求2所述基因或權(quán)利要求3或4所述重組質(zhì)粒或權(quán)利要求5或6所述宿主細(xì)胞或權(quán)利要求7所述制備方法或權(quán)利要求8所述方法在生產(chǎn)長鏈糖基化染料木素中的應(yīng)用。