[發明專利]一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型及其應用在審
| 申請號： | 201911077819.7 | 申請日： | 2019-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN110656092A | 公開（公告）日： | 2020-01-07 |
| 發明（設計）人： | 王選年;孫國鵬;何海汛;岳鋒;李鵬;張艷芳;朱艷平;郭東光;陳威;李丹;蔣力維 | 申請（專利權）人： | 新鄉學院 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/12;G01N33/569 |
| 代理公司： | 11004 北京中建聯合知識產權代理事務所(普通合伙) | 代理人： | 旦帥男;王靈靈 |
| 地址： | 453003 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細胞模型 真核宿主細胞 成熟蛋白 熒光表達 信號肽 真核 蛋白 細胞膜 細胞膜表面 信號肽序列 真核細胞膜 蛋白展示 全長序列 瞬時表達 細胞表面 細胞形成 多肽 構建 抗體 錨定 轉染 應用 展示 篩選 細胞 基因 | ||
1.一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型，其特征在于：所述細胞模型是可表達PD-1成熟蛋白全長序列的真核宿主細胞，所述真核宿主細胞由構建完成的真核熒光表達載體轉染至293T細胞形成，所述真核熒光表達載體在293T細胞上瞬時表達PD-1蛋白，并將PD-1蛋白展示在293T細胞表面。
2.如權利要求1所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型，其特征在于：所述真核熒光表達載體為pECFP-Fc-PD-1重組載體，先由添加Kozak序列和酶切位點的牛Fcγ受體信號肽序列，插入到真核表達載體pECFP-N1的多克隆位點中形成pECFP-Fc重組載體，之后構建T-PD-1重組載體，將pECFP-Fc重組載體和T-PD-1重組載體進行酶切酶連形成pECFP-Fc-PD-1重組載體。
3.如權利要求2所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型，其特征在于：所述PD-1成熟蛋白全長序列位于牛Fcγ受體信號肽序列的下游，并與真核表達載體pECFP-N1中的ECFP蛋白融合表達。
4.如權利要求3所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型，其特征在于：所述PD-1成熟蛋白全長序列是犬PD-1成熟蛋白全長序列，其編碼的DNA是如SEQ IDNo:1所示序列。
5.如權利要求4所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型，其特征在于：所述pECFP-Fc-PD-1重組載體完整DNA序列是如SEQ ID No:2所示序列。
6.如權利要求2所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型，其特征在于：所述牛Fcγ受體信號肽序列添加Kozak序列、酶切位點
7.如權利要求1~6所任意一項所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型的應用方法，其特征在于：所述細胞模型在篩選能與PD-1結合的生物大分子中的應用。
8.如權利要求7所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型的應用方法，其特征在于：所述細胞模型在篩選能與PD-1結合的多肽中的應用，以該細胞模型為底物加入隨機十二肽庫，經過三輪淘洗并測序，得到能與PD-1結合的多肽。
9.如權利要求7所述的一種細胞膜表面展示含雙信號肽PD-1蛋白的細胞模型的應用方法，其特征在于：所述細胞模型在篩選能與PD-1結合的抗體中的應用，以該細胞模型為底物加入待篩選的抗體，再加入熒光標記的二抗顯色，進行抗體篩選。
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