[發(fā)明專利]柞蠶表皮生長因子的截斷蛋白AP-EGF及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911075930.2
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110713532B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樸玉蘭;劉雋彥;錢琨;張春楊;薛強(qiáng);張月;周影
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: C07K14/485
• 分類號: C07K14/485;C12Q1/6876;C12N15/11;A61K38/18;A61P17/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發(fā)明提供了一種柞蠶表皮生長因子的截斷蛋白AP?EGF及其制備方法和應(yīng)用，涉及基因功能研究技術(shù)領(lǐng)域，所述截斷蛋白AP?EGF的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)所述截斷蛋白AP?EGF后，經(jīng)過包涵體蛋白的變復(fù)性和純化后，進(jìn)行細(xì)胞劃痕實驗和傷口愈合實驗，結(jié)果表明，有劃痕的HaCaT細(xì)胞系中，經(jīng)過48h后，所述截斷蛋白AP?EGF與TGF?β1產(chǎn)生了相似的細(xì)胞生長效果；對大鼠模型施加所述截斷蛋白AP?EGF后，第3d開始就有明顯的治愈傷口效果，到第15d時傷口基本治愈，可將所述截斷蛋白AP?EGF用于制備促進(jìn)細(xì)胞生長和傷口愈合的試劑或藥物中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因功能研究技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及種柞蠶表皮生長因子的截斷蛋白AP-EGF及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

人表皮生長因子是由50－60個氨基酸分子組成的肽鏈，它具有促進(jìn)皮膚組織、角膜上皮組織及胃、肺、氣管上皮細(xì)胞的繁殖，加速受傷表皮細(xì)胞的修復(fù)，還有抑制胃酸分泌等功效。廣泛應(yīng)用于燒傷、燙傷、創(chuàng)傷、潰瘍類疾病的治療及皮膚移殖和美容整形上，在醫(yī)藥及化妝品領(lǐng)域上有很廣的用途。早期的EGF是從人的胎盤、尿液中提取的，資源有限，而且其中的含量極低。由于生產(chǎn)成本高、價格昂貴、產(chǎn)量低，滿足不了市場需求等問題。

柞蠶，學(xué)名：Anthereapernyi(Guerin-Meneville,1855)，鱗翅目大蠶蛾科柞蠶屬。蠶是一類人工大量飼養(yǎng)的昆蟲，在其生長階段由蟻蠶到成蠶需經(jīng)四次蛻皮、體重也隨之增長兩千多倍，生長速度是大多數(shù)動物所不能比擬的。目前關(guān)于表皮生長因子的研究報道多見于哺乳動物中，對柞蠶EGF基因的相關(guān)報道和研究還未發(fā)現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于一種柞蠶表皮生長因子的截斷蛋白AP-EGF及其制備方法和應(yīng)用，所述截斷蛋白AP-EGF具有顯著的促進(jìn)細(xì)胞生長和傷口愈合作用，可用于制備相應(yīng)的試劑或藥物，從而解決了生產(chǎn)成本高、價格昂貴、產(chǎn)量低，滿足不了市場需求等問題。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種柞蠶表皮生長因子的截斷蛋白AP-EGF，所述截斷蛋白AP-EGF的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明還提供了所述截斷蛋白AP-EGF的制備方法，包括以下步驟：將柞蠶表皮生長因子的基因EGF經(jīng)過轉(zhuǎn)錄翻譯后，得到柞蠶表皮生長因子EGF，去除所述柞蠶表皮生長因子EGF的跨膜區(qū)域，得所述截斷蛋白AP-EGF；所述柞蠶表皮生長因子的基因EGF的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述柞蠶表皮生長因子EGF的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

優(yōu)選的，所述柞蠶表皮生長因子EGF的跨膜區(qū)域分別在47～70氨基酸處和160～183氨基酸處。

本發(fā)明還提供了一組檢測所述制備方法中柞蠶表皮生長因子的基因EGF的引物對，包括正向引物AP-EGF-S1和反向引物AP-EGF-AS1，所述正向引物AP-EGF-S1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述反向引物AP-EGF-AS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本發(fā)明還提供了所述截斷蛋白AP-EGF或利用所述制備方法制備得到的截斷蛋白AP-EGF或所述引物對在制備促細(xì)胞生長試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述截斷蛋白AP-EGF或利用所述制備方法制備得到的截斷蛋白AP-EGF或所述引物對在制備促細(xì)胞生長藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述截斷蛋白AP-EGF或利用所述制備方法制備得到的截斷蛋白AP-EGF或所述引物對在制備促進(jìn)傷口愈合試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述截斷蛋白AP-EGF或利用所述制備方法制備得到的截斷蛋白AP-EGF或所述引物對在制備刺進(jìn)傷口愈合藥物中的應(yīng)用。